[发明专利]一种青蛤抗肿瘤酶解寡肽

说明书

本发明公开了一种青蛤抗肿瘤酶解寡肽。本发明以青蛤为原料，通过超滤、HPLC纯化制得青蛤抗肿瘤酶解寡肽，该寡肽的氨基酸序列为Ile‑Leu‑Tyr‑Met‑Pro，分子量为635.82Da。该寡肽具有抗肿瘤活性，可以作为抗疲劳功能食品或保健食品进行开发。

技术领域

本发明涉及一种海洋生物活性寡肽，具体涉及一种青蛤抗肿瘤酶解寡肽。

背景技术

前列腺癌的发病率在男性恶性肿瘤中位居首位，好发于老年男性。在我国，前列腺癌发病率呈逐年上升趋势，居泌尿系统肿瘤的首位，严重威胁老年男性的健康。传统治疗方法如手术、放疗和冷冻治疗等效果并不理想，且复发率比较高，并且当复发的前列腺癌转化为非雄激素依赖性时，治疗将更困难；而化疗药物产生耐药性后，疗效更差并毒副作用明显。因此，寻找抗前列腺癌药物成为学者们研究的热点。海洋是发现新型抗癌药物的一个丰富的资源宝库，多种海洋寡肽、糖胺聚糖等都具有抗肿瘤、抗病毒、抗真菌等生理活性。从双壳贝类中提取的文蛤寡肽Mere15、菲律宾蛤仔寡肽对人慢性骨髓性白血病K562细胞、前列腺癌细胞具有增殖抑制作用，并导致浓度依赖性细胞凋亡；从近江牡蛎提取的糖胺聚糖具有体内外抗肿瘤活性，不仅可以抑制K562、CNE-2Z、Hela细胞的生长，还对CTX损伤小鼠的免疫功能有一定的修复作用。青蛤(Cyclina sinensis)属于软体动物门，鳃瓣纲，异齿亚纲，帘蛤目、帘蛤科，含高蛋白、低脂肪和高含量的不饱和脂肪酸，味道鲜美，具有很好的营养价值。青蛤在民间入药具有悠久的历史，是一种重要的海洋药物，具有软坚散结、清热燥湿及镇咳作用。Changxing J等从青蛤中提取出的多糖具有抗氧化和保肝活性，对人胃癌BGC-823细胞的生长具有强烈的抑制作用。然而，目前关于青蛤寡肽的提取及活性的研究报道并不多，本实验采用蛋白酶酶解青蛤内脏，经正交实验获得最佳酶解条件，经分离纯化，筛选出活性寡肽，研究其体外抗人前列腺癌DU-145细胞的活性，以期为青蛤活性寡肽的制备及抗癌作用研究提供实验依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有抗肿瘤功效的青蛤抗肿瘤酶解寡肽。

本发明为解决上述技术问题所采取的技术方案为：该寡肽的氨基酸序列为Ile-Leu-Tyr-Met-Pro(ILYMP)，分子量为635.82Da。

该肽采用如下方式制备：

1)取青蛤匀浆，以活性酶在最适酶解温度及pH值条件下，加蛋白酶200～12000U/g、保温4～10h进行酶解；然后后灭活，在0～4℃、12000r/min的条件下离心，取上清；

2)取最佳酶种及最优酶解条件下酶解的上清液，用截留分子量为3ku的超滤膜进行超滤；

3)取超滤组分进行琼脂糖凝胶层析分离，浓度：0.01～0.5g/mL，离心后取上清过0.22μm滤膜，进行洗脱；收集洗脱产物，冷冻干燥；

4)取组分过HPLC进一步分离得到青蛤抗肿瘤酶解寡肽。

与现有技术相比，本发明提供的一种青蛤抗肿瘤酶解寡肽的优点在于：本发明工艺科学合理，操作简单，随着青蛤抗肿瘤酶解寡肽(CSOP)浓度的增加，作用时间的延长，DU-145细胞的增殖抑制率明显上升；倒置显微镜下观察、AO/EB荧光染色、Hoechst 33258荧光染色及透射电镜技术实验表明细胞出现凋亡的形态学变化；流式细胞术结果表明，细胞早期凋亡率及线粒体膜电位下降所占百分率增加，且随着CSOP浓度增加，早期凋亡率增加较为明显，其膜电位下降更为显著，即预示线粒体凋亡信号通路在CSOP诱导的DU-145细胞凋亡过程中起着重要作用。同时，本发明所制备的青蛤抗肿瘤酶解寡肽是天然原料经酶解制得，安全、无毒副作用，抗肿瘤活性显著，青蛤抗肿瘤酶解寡肽可以作为抗前列腺癌药品、功能食品进行开发。

附图说明

图1本为发明实施例分子结构示意图；

图2本为发明实施例琼脂糖凝胶柱洗脱峰示意图；