[发明专利]一种基于对Rbmy基因进行编辑来实现动物性别控制的方法和应用

权利要求书

1.一种实现小鼠性别控制的方法，其特征在于，所述方法是通过利用CRISPR/Cas9系统特异性地切割小鼠Y染色体上的Rbmy基因来实现小鼠性别控制的：所述的CRISPR/Cas9系统特异性地切割小鼠Rbmy基因的靶位点基因序列如SEQ ID NO:6所示；识别Rbmy基因的靶位点基因序列有效sgRNA表达载体为pU6-sgRNA6表达载体，所述的pU6-sgRNA6表达载体包含如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的序列；所述的pU6-sgRNA6表达载体显微注射入小鼠受精卵雄原核的浓度为10-50ng/μl；phCas9质粒显微注射入小鼠受精卵雄原核的浓度为25-125ng/μl；所述注射入小鼠受精卵雄原核的pU6-sgRNA6表达载体与phCas9质粒混合物的体积为5-15pl。

2.根据权利要求1所述的实现小鼠性别控制的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)选择小鼠Rbmy靶基因上的靶位点；

2)根据靶位点基因序列设计相应的sgRNA表达载体及靶载体；

3)将靶载体、sgRNA表达载体与phCas9质粒共同转染细胞，进行体外检测sgRNA表达载体的切割效率；

4)体外检测筛选出有效的sgRNA表达载体；

5)将筛选出的有效sgRNA表达载体与phCas9质粒混合显微注射入小鼠受精卵的雄原核中；

6)对处理后的受精卵进行胚胎移植至代孕雌性小鼠子宫内。