[发明专利]重组酮还原酶在制备(R)-3,5-二（三氟甲基）苯乙醇中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种重组酮还原酶在制备(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇中的应用。

背景技术

阿瑞匹坦(Aprepitant)是获FDA批准上市的第一个神经激肽-1(NK-1)受体阻滞剂，用于预防化疗引起的急性和延迟性恶心、呕吐等不良反应，由默克公司研发生产。该产品于2003年获美国FDA批准，2013年7月16日获中国国家食品药品监督管理局的进口注册批准。2014、2015年销售额分别高达5.53和5.35亿美元。其结构式如下所示：

福沙吡坦二甲葡胺(Fosaprepitant dimeglumine)也是一种高效止吐剂，联合阿瑞吡坦可明显提高化疗所致恶心、呕吐的控制效果。2008年2月FDA批准Merk公司的福沙匹坦二甲葡胺的上市申请；该产品2008年3月在英国上市，5月在德国上市，截止目前该品种已在欧、美、日等20多个国家上市。其结构式如下所示：

罗拉匹坦(Rolapitant)是一种高选择性P物质/神经激肽-1(NK-1)受体拮抗剂，用于治疗化疗引起的恶心呕吐，生产厂家为美国Tesaro公司，2015年9月经FDA获批，商品名为Varubi。Varubi的上市，将为预防迟发性CINV提供一种新的治疗选择，预计年销售额峰值可达4亿美元。其结构式如下所示：

其中(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇是合成阿瑞匹坦、罗拉匹坦、福沙吡坦二甲葡胺等匹坦类药物的关键中间体，国内外对其制备方法进行广泛研究，目前主要制备方法包括化学法和生物法。

化学合成法(Organic Process Research&Development,11,519-523,2007)以3,5-双三氟甲基苯乙酮为底物，Ru等贵金属配合物为催化剂不对称合成产物(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇，该方法存在金属催化剂昂贵，产品光学纯度不高等缺点。

生物合成法主要是以酮还原酶为催化剂，将3,5-双三氟甲基苯乙酮不对称合成(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇。David Pollard等人(Tetrahedron:Asymmetry,17,554-559,2006)报道了一种来源于Lactobacillus kefir DSM 20587的酮还原酶，能将3,5-双三氟甲基苯乙酮还原为(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇，但该酶在催化过程中存在底物浓度较低(20mM)，反应产率过低(15％)等缺点，无法满足工业应用要求。

Dunming Zhu等人(Tetrahedron:Asymmetry,16,1541-1546,2005)公开了以3,5-双三氟甲基苯乙酮为底物，酮还原酶为催化剂在葡萄糖/葡萄糖脱氢酶体系中合成产物(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇的方法，其中该文献只揭露酮还原酶购自BioCatalytics.Inc的KRED 126，并未公开其基因序列和氨基酸序列，该方法中底物浓度仅为1.25mM，转化率(21％)和产物ee值(92％)均较低，无法满足工业化生产需求。

Mirjana Gelo-Pujic等人(Tetrahedron:Asymmetry,17,2000-2005,2006)采用高加索乳杆菌(Lactobacillus kefir DSM 20587)全细胞还原3,5-双三氟甲基苯乙酮得到产物(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇，其中所用的催化剂为高加索乳杆菌野生菌，该方法最大的缺点在于底物浓度过低约1-2g/L，严重影响其工业化应用。

发明内容

为了克服现有技术所存在的上述缺陷，本发明公开了一种重组酮还原酶在制备(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇中的应用。

具体生物酶催化制备(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇工艺路线如下所示：

为实现上述发明目的，本发明公开了一种重组酮还原酶在制备(R)-3,5-二(三氟甲基)苯乙醇中的应用，其中重组酮还原酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2、4、6、8、10中任一项所示。

进一步说，编码重组酮还原酶的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1、3、5、7、9中任一项所示。