[发明专利]绒毛皂荚组织培养再生体系的建立方法

说明书

本发明公开了绒毛皂荚(Gleditsia vestita Chun et How ex B.G.Li.)组织培养再生体系的建立方法。以绒毛皂荚(Gleditsia vestita Chun et How ex B.G.Li.)无菌苗的子叶为外植体，通过愈伤组织诱导、不定芽增殖、生根和驯化移栽，建立绒毛皂荚组织培养的快速繁殖体系。结果表明：(1)绒毛皂荚子叶在MS+6‑BA3.0mg/L+KT0.4mg/L+IAA0.3mg/L培养基上同步诱导出愈伤和芽，平均诱导率达到90.5％；(2)不定芽增殖的最佳培养基为1/2MS+6‑BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L，增殖倍数为4.0；(3)MS+NAA0.5mg/L+IAA0.25mg/L条件下，生根率高达100％；移栽后植株长势好，成活率高达90％以上。

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及绒毛皂荚(Gleditsia vestita Chun etHow ex B.G.Li.)组织培养再生体系的建立方法。

背景技术

绒毛皂荚(Gleditsia vestita Chun et How exB.G.Li.)又名毛果皂荚，为湖南特有种，是国家二级保护植物。野生绒毛皂荚比“植物界熊猫”之称的银杉还稀少，现原生种仅存4株于南岳山麓，其中有一株已经空心腐朽。从分类学意义上来说，绒毛皂荚是豆科植物中较为原始的种，在研究整个豆科植物进化分类上有重要价值。同时绒毛皂荚还具有较高的经济价值：果实中含有丰富的胰皂素，可作为丝绸和家具的洗涤剂，将来可以作为新型环保洗涤材料的原料；从外形上看绒毛皂荚树形优美，植物体上长有枝刺十分奇特，春季花叶同放，开花时花量大，密满花相，结果时，果实金光闪闪十分好看，为园林上不可多得的庭院树种；相对来说绒毛皂荚生长速度较快，而且木质坚硬，不易扭曲可作为家具材料。

绒毛皂荚种子结果量多，一个豆荚内大约有20至30粒种子，由于其豆荚和种皮的特殊生理结构，种子在自然条件下很难发芽成苗，自然更新十分缓慢。国内学者为了保护这一珍稀树种，增加其种群数量，进行了大量研究，但有关组织培养快繁技术体系的研究尚少见报道。本发明以种子为外植体，通过正交设计，探索不同激素浓度组合对绒毛皂荚愈伤诱导、分化、增殖、生根的影响，建立了绒毛皂荚组织培养的快速繁殖体系，对保护绒毛皂荚种质资源具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供快速高效的绒毛皂荚(Gleditsia vestita Chun et How exB.G.Li.)组织培养再生体系的建立方法。

绒毛皂荚组织培养再生体系的建立方法，包括以下步骤：

1)外植体消毒及无菌苗的培养

将采集的绒毛皂荚种子于超净工作台消毒清洗备用，将消毒后的种子接种在培养基上培养无菌苗；

2)愈伤组织的诱导

取种子无菌苗子叶，切成适当大小接种在MS+6-BA3.0mg/L+KT0.3-0.6mg/L+IAA0.1-0.3mg/L培养基上同步诱导出愈伤组织和芽；

3)不定芽的增殖

将不定芽接种于1/2MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1-0.5mg/L+NAA0.2-0.6mg/L培养基中进行增殖培养；

4)不定芽生根培养和驯化移栽。

步骤1)所述的外植体消毒过程如下：将采集的绒毛皂荚种子于超净工作台70％酒精处理30s，再用0.1％升汞消毒30min，无菌水清洗5次备用；所述的无菌苗的培养过程如下：将消毒后的种子接种在MS培养基上,18-22℃进行发芽试验，待培养至无菌苗长至5-7cm时用于步骤2)。

步骤2)取种子无菌苗子叶，将子叶切成1cm²大小，用于接种，步骤2)的MS培养基中蔗糖为3％，琼脂为0.5％，pH值为5.90-5.95。