[发明专利]一种黄绿木霉菌株及用其制备铁皮石斛烟用香料的方法有效
申请号: | 201610239940.5 | 申请日: | 2016-04-18 |
公开(公告)号: | CN105733994B | 公开(公告)日: | 2019-01-15 |
发明(设计)人: | 党立志;汪显国;王明锋;冒德寿;何靓;者为;赵升奎 | 申请(专利权)人: | 云南中烟工业有限责任公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12P1/02;A24B3/12;C12R1/885 |
代理公司: | 昆明协立知识产权代理事务所(普通合伙) 53108 | 代理人: | 谢嘉 |
地址: | 650231 云南省昆明*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 黄绿 霉菌 制备 铁皮 石斛 香料 方法 | ||
1.一种制备铁皮石斛烟用香料的方法,包括以下步骤:
(1)将保藏编号为CGMCC No.10839的黄绿木霉HLMM-04(Trichoderma aureoviride)菌株活化两次后,接种于装有200mL PDA液体培养基的三角瓶中,在20~35℃,180rpm下发酵培养1~7d;所述的PDA液体培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,补蒸馏水至1L,pH5.5~8.5,115℃高压灭菌15min;所述的黄绿木霉HLMM-04 CGMCC No.10839菌株,具有产纤维素酶,进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力;
(2)发酵液过滤去除菌体,取上清液缓慢加入硫酸氨至80%饱和度,4℃下静置过夜,离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中,再用缓冲液进行透析,得到粗酶液;所述的缓冲液为:0.02mol/L Na2HPO4-NaH2PO4,pH 7.3;
(3)将铁皮石斛去污洗净,破碎后加入两倍重量的水,混合均匀,调pH至6.0;加入黄绿木霉HLMM-04粗酶液,发酵,粗酶液添加量为铁皮石斛质量的5%~20%,发酵温度为30℃,发酵时间2~5h;回流提取3h,过滤除渣,将上清液减压浓缩,即得所需烟用香料。
2.根据权利要求1所述的制备铁皮石斛烟用香料的方法,其特征在于:按烟用香料重量的5%添加丙二醇。
3.根据权利要求1所述的制备铁皮石斛烟用香料的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的发酵培养条件为初始pH 6.5,培养温度28℃,培养时间5d。
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