[发明专利]一种特异性检测肽聚糖的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及试剂盒，尤其是涉及一种特异性检测肽聚糖的试剂盒。

背景技术

由细菌感染而导致的菌血症及败血症等严重威胁着人类生命健康。近年来，因细 菌感染引起的感染性疾病的发病率随着抗生素滥用、免疫抑制及免疫耐受人群的快速扩大 而急剧上升，主要原因包括以下几个方面：一是导致机体抵抗力严重低下的各种危重疾患 不断增多，包括恶性肿瘤和恶性血液病、艾滋病、糖尿病、自身免疫病、严重烧伤和创伤、长 期吸毒等，以及人口老龄化趋势的加快，这些疾病的患者无疑是细菌感染的高危人群；另一 方面，科学的进步、医学的发展在提高疗效增进健康的同时也造成了不可避免的负面影响， 如医源性免疫受损，包括广谱抗生素、皮质类固醇激素和免疫抑制剂的广泛使用，腹膜透 析、化疗放疗和导管插管等新技术的推广普及，这些都成为细菌感染的危险因素。

肽聚糖为细菌所特有，是细菌细胞壁的主要组成成分，广泛存在于革兰氏阳性菌 （G+）和革兰氏阴性菌（G-）的细胞壁中，其中革兰氏阳性细菌胞壁所含的肽聚糖占干重的 50-80%，革兰氏阴性细菌胞壁所含的肽聚糖占干重的5-20%。真菌、病毒、动植物细胞和人体 细胞及其他病原体均无此成分。细菌入侵人体后，被人体白细胞吞噬，在溶酶体等的消化作 用下细菌的细胞壁被破坏，细胞壁中的肽聚糖被释放到血液中，引起血液中肽聚糖含量的 升高，因此，人血中肽聚糖的检测是诊断人体无菌体液细菌感染，特别是革兰氏阳性菌感染 的一个重要的指标。

目前肽聚糖检测方法主要是血淋巴法和速率微孔板法。日本和光纯药的SLP试剂 和Immunetics公司的BacTx?BacterialDetectionKit等产品，就是采用的血淋巴法。但 是和光纯药的SLP试剂不能区分肽聚糖和葡聚糖，而肽聚糖和葡聚糖分别指示的是细菌感 染和真菌感染，治疗药物完全不同，且该种方法还不能用于人体检测；Immunetics公司的 BacTx?BacterialDetectionKit已通过美国FDA认证，但是也不能区分肽聚糖和葡聚 糖，且仅能检测人体血液制品（血小板）。速率微孔板法是根据样本加入后显色速率的变化 判断样品中肽聚糖的有无及多少，其缺点是：（1）、必须使用带温浴、震板功能同时进行动力 学读数的酶标仪。（2）、检测过程中需要较长时间占用酶标仪。（3）、实验体系反应结束后，反 应体系不能较长时间保存，不能重复测量检测结果。（4）、不能采用肉眼对于显色结果进行 判读。除此之外，肽聚糖的检测方法还有双抗体夹心的酶联免疫法，这种方法目前仅见用于 某些动物样本的肽聚糖含量检测，由于抗肽聚糖单抗可能仅仅用某种细菌细胞壁的肽聚糖 成份免疫所得，因此能否检测所有细菌至少检测多数细菌的肽聚糖尚值得怀疑，也就是说 此产品的灵敏度尚待考证和提高。

相比血培养、病理组织学方法等耗时长、敏感性低、容易受到干扰等不足，肽聚糖 检测需要具有简便、快速、准确、特异、灵敏度高等优点的其他检测方法有望作为传统检测 方法的补充，为临床快速早期诊断人体无菌体液细菌感染提供全新的技术手段。但目前该 市场还在开发中，市场上现有的产品还存在一些严重缺陷，要么是肽聚糖与葡聚糖混合检 测，不能特异性检测肽聚糖，要么是方法学的灵敏度尚待考证和提高，因此临床实验室迫切 需要灵敏度和特异性能够满足对细菌感染诊断需求的肽聚糖检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的就在于针对现有技术存在的缺陷，提供一种不受葡聚糖等因素干 扰，操作简单，易于推广的特异性检测肽聚糖的试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的特异性检测肽聚糖的试剂盒，包括酚氧化酶原，显色液，肽聚糖标准品， 为避免葡聚糖等其他干扰因子的影响，本发明试剂盒还包括碱金属氢氧化物处理剂或生物 缓冲液处理剂以及由碱金属氢氧化物和生物缓冲液组成的中和液处理剂。

为长久保存反应结果，本试剂盒还包括1%~10%的酸性终止液，其酸性终止液可为 HCl、H₂SO₄、草酸、甲酸、乙酸、丁二酸、苯甲酸或柠檬酸等。

本发明试剂盒所用的碱金属氧化物处理剂为0.01%~15%的KOH或NaOH等；所用的生 物缓冲液处理剂为0.05%~10%的TAPS、EPPS、ACES、BES、Bicine、CHES、HEPES、HEPPSO、MES、 MOPS、MOPSO、CAPS、TAPSO、TES或Tricine。