[发明专利]一种羊水检测试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，更具体地说涉及一种羊水检测试纸及其制备方法。

背景技术

羊水(amniotic fluid)是羊膜腔中的液体。作用是保护胎儿免受损伤、缓冲外来压力使胚胎免受震荡、防止羊膜和胚体的粘连并提供胚胎自由生长活动的条件，维持胚胎发育所需的液态环境。分娩时，有助于扩张宫颈、清洗及润滑产道，以便于胎儿产出。羊水的容量、来源及其组成随人妊娠期的不同而有变化。妊娠早期羊水清澈，98％为水分，含无机盐、蛋白质、葡萄糖、酶、脂肪和激素等。这些物质主要为羊膜细胞所分泌。妊娠后期的羊水略有混浊，这是因为加入了胎儿的分泌物、排泄物如尿素、尿酸、皮脂质、激素以及胎儿脱落的上皮细胞。羊水检查是诊断产科疾病的重要方法之一，及时发现羊水渗漏，才能减少孕期风险。

因胎膜破裂或早破引起孕妇羊水渗漏是无意识的，不能控制，并且是持续性的，羊水渗漏到一定程度会因羊水过少造成胎儿窒息，危害极大。

现有监测羊水渗漏技术中，采用的金标准是监测的一种准确方法，即在孕妇羊膜腔内经穿刺注入染料(如美蓝)，若阴道内有被感染着色的液体流出即可诊断为羊水渗漏，但采用金标准检测临床风险极大，并且造成患者的痛苦，故临床基本不用。而临床上通常采用询问病史、患者自诉阴道有羊水流出、阴道分泌物pH值变味偏碱性(正常阴道分泌物pH为4.5～5.5)、显微镜下查见阴道分泌物涂片中出现羊水结晶等方法，这些方法虽然操作简单，但准确性、敏感性均较低，也不为采用。

羊水检测试纸应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，利用抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。层析过程中，金标记物于事先固相化于层析材料：如硝酸纤维素膜即NC膜上的抗原或抗体发生特异性的免疫反应而被截留，进一步富集，形成肉眼可见紫红色条带，从而得到直观的实验结果，达到检测的目的。

国际专利PCT/US2003/025125公开了一种采用双抗夹心胶体金免疫层析法检测阴道分泌物中羊水的装置和方法，其使用的两种单克隆抗体是针对a1-微球蛋白(PAMG-1)的不同抗原表位有。中国专利申请200620083734.1公开了一种一次性羊水渗漏pH试纸诊断棒，但其敏感度不高，易引起假阴性。国际专利WO2007030890公开了一种利用ELISA方法检测羊水的方法，该法耗时长，需要操作仪器，对操作人员要求较高。因此亟需一种灵敏度高又便于操作、快捷的新型羊水监测试纸。

本发明通过研究优化到一对胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)抗体， 以最佳的包被及标记抗体浓度，制备出羊水检测试纸，该试纸特异性好、灵敏度高、检测快速且使用过程安全简便，宫颈黏液、精液和尿液对试纸均无影响，优于目前临床应用的PH试纸等方法。

在漫长的孕期，孕妇会因各种意外导致胎膜破裂，产生羊水渗漏，而去医院则面临无尽的等待，哪怕一个小小检查，这又给孕妇带来无尽的风险。本发明试纸适合长期监测使用，操作简便可以进行家庭自测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性好、灵敏度高、检测快速且对孕妇使用方便的羊水检测试纸：使用时取阴道分泌物进行体外检测，安全可靠，可用于家庭自测及床边及时检验。

本发明的另一目的在于提供这种羊水检测试纸的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种羊水检测试纸及其制备方法，其特征在于：试纸条由在检测区(T)硝酸纤维素膜上包被的鼠抗人胰岛素样生长因子结合蛋白-1单克隆抗体1和质控区(C)硝酸纤维素膜上包被羊抗鼠多克隆抗体及聚酯膜上吸附的胶体金-鼠抗人胰岛素样生长因子结合蛋白-1单克隆抗体2组成，

在一个优选的实施方案中，所述检测试纸为试纸条，由下往上依次由浸入区、胶体金鳌合区、检测区、质控区和手持区组成。

一种羊水检测试纸的制备方法，其特征在于工艺步骤如下：

(1)处理液的配置步骤：按浓度比例配置金标垫处理液、样品垫处理液、点膜抗体稀释液、标记抗体稀释液和胶体金复合物稀释液；

(2)试纸的制备步骤：通过膜材的处理、点膜、胶体金复合物的制备、喷金、膜材的切割、组装、大板的切割和包装步骤得到铝箔袋封装完整的试纸。

在点膜配液时，取羊抗鼠多克隆抗体，用PBS稀释成0.5mg/ml的抗体溶液。取胰岛素样生长因子结合蛋白-1单克隆抗体1，用PBS稀释成1.0mg/ml的抗体溶液。