[发明专利]皮肤特异表达绵羊Wnt10b基因的表达盒、载体及应用

说明书

本发明公开了一种皮肤特异表达绵羊Wnt10b基因的表达盒、载体及应用。本发明所提供了一种DNA分子，自上游至下游依次包括绵羊毛囊组织特异性启动子KAP6.1和绵羊Wnt10b基因；所述绵羊Wnt10b基因编码序列表的序列3所示的绵羊Wnt10b蛋白；所述绵羊毛囊组织特异性启动子KAP6.1如序列表的序列1自5’末端第9至1531位核苷酸所示。本发明所提供了相应的表达盒和载体，能够在动物皮肤中特异性表达绵羊Wnt10b基因，提高动物的毛囊密度，进而提高产毛量。本发明为进一步研究Wnt10b基因在毛囊发育和周期性变化过程中的作用机制奠定基础。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种皮肤特异表达绵羊Wnt10b基因的表达盒、载体及应用。

背景技术

羊毛的生长受多种因素影响，毛囊是毛纤维的“发源地”，因此毛囊的生长发育和性状决定着羊毛的品质和产量。绵羊毛囊在胚胎期形成，表皮细胞和真皮细胞在一系列复杂的信号因子调控下，促使上皮细胞和真皮细胞增殖、分化并逐渐形成完整毛囊结构。近年来研究发现，Wnt10b作为“第一表皮信号”在小鼠毛囊形成初始阶段即表达于毛基板，同时伴随着毛囊发育持续表达。体外分离培养小鼠未分化的真皮乳头细胞，发现Wnt10b蛋白通过经典Wnt通路，诱导未成熟的表皮细胞向毛干及内根鞘细胞分化，同时具有维持毛乳头细胞的生物活性并维持毛干生长的能力。Wnt10b蛋白在毛囊中特异性表达于毛母质细胞中，可使体外培养毛囊由静止期向生长期转化。在绒山羊全年毛囊生长过程中发现，Wnt10b在绒山羊毛囊中特异性地表达于毛母质细胞中，且在毛囊生长过程中呈周期性表达。虽然大量研究表明Wnt10b能够启动毛囊发育和再生，但是其作用机理尚不明确。

发明内容

本发明的目的是提供一种皮肤特异表达绵羊Wnt10b基因的表达盒、载体及应用。

本发明首先提供了一种DNA分子，自上游至下游依次包括绵羊毛囊组织特异性启动子KAP6.1和绵羊Wnt10b基因。

所述绵羊Wnt10b基因编码序列表的序列3所示的绵羊Wnt10b蛋白。

所述绵羊Wnt10b基因具体可如序列表的序列2自5’末端第16至1188位核苷酸所示。

所述绵羊毛囊组织特异性启动子KAP6.1具体可如序列表的序列1自5’末端第9至1531位核苷酸所示。

所述DNA分子中，在所述绵羊Wnt10b基因的起始密码子前还可具有kozak序列；所述kozak序列具体如序列表中序列2的自5’末端第10至15位核苷酸所示。

所述DNA分子中，在所述绵羊Wnt10b基因的下游还具有荧光标记基因；所述荧光标记基因具体为EGFP基因；所述EGFP基因具体可为pcDNA3.1-EGFP载体中的EGFP基因。

含有所述DNA分子的载体也属于本发明的保护范围。

在本发明中，所述载体具体为将所述绵羊毛囊组织特异性启动子KAP6.1插入到pcDNA3.1-EGFP载体的酶切位点MluI和NheI之间，并将所述绵羊Wnt10b基因插入到所述pcDNA3.1-EGFP载体的酶切位点NheI和EcoRI之间得到的重组质粒。

所述DNA分子或所述载体在如下任一中的应用也属于本发明的保护范围：

(a)表达绵羊Wnt10b基因；

(b)制备在动物皮肤中特异性表达绵羊Wnt10b基因的产品；

(c)促进动物皮肤毛囊密度增加；

(d)制备用于促进动物皮肤毛囊密度增加的产品；

(e)提高动物产毛量；

(f)制备用于提高动物产毛量的产品。