[发明专利]一种利用酶解法制备肝素钠的方法

说明书

技术领域

本发明属于生化行业领域，特别涉及一种利用酶解法制备肝素钠的方法。

背景技术

肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，主要存在与肥大细胞中，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。肝素的分子量大约3000—37500，对商品肝素的研究提示至少有21种分子个体，肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视.也是我国主要的出口药物之一，随着研究的深入，人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用，还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。肝素钠粗品是我国的传统出口产品，在国际上占有重要的地位。但是传统生产工艺落后，肝素钠产率低，肝素钠产品质量不稳定。

发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种疗效快、治愈率高的利用酶解法制备肝素钠的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种利用酶解法制备肝素钠的方法，包括以下步骤：

(1)酶解:取小肠粘膜，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0％，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.5-8，每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45-55℃，保温1小时后，过80目滤膜，收集过滤液，在滤液中加入2709碱性蛋白酶，保温1小时；

(2)升温:步骤(1)结束后，将步骤(1)中酶解中的滤液加热至温度60-65℃，保温5分钟，过80目滤膜，收集过滤液；

(3)树脂吸附:将步骤(2)中所得过滤液加入到吸附罐中，每40L滤液中加4-6g树脂，进行搅拌，然后降温至55℃，保温55℃并搅拌吸附8小时后过滤，放出废液；

(4)洗脱:步骤(3)结束后，收集过滤后的树脂，每克树脂中加入质量分数为24％的饱和盐水20ml，保持55℃洗脱，收集洗脱液；

(5)醇沉:将步骤(4)中收集的洗脱液过滤，然后移入沉淀罐中，加入乙醇沉淀肝素钠；

(6)烘干:步骤(5)结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。

其中，步骤(1)中所述小肠粘膜与肠衣专用盐的质量比例为100:3-4；小肠粘膜与2709碱性蛋白酶的质量比为4000:1-2。

其中，步骤(1)中所述小肠粘膜与水的质量比1:9。

其中，步骤(1)中所述胰酶与2709碱性蛋白酶的重量比4:5-10。

其中，步骤(2)中所述步骤(1)中酶解中的滤液的温度为50-55℃。

传统生产工艺在肝素钠生产过程中，往往对料渣不做处理直接倒掉。而料渣中解离不完全的肝素钠也料渣一起倒掉，致使产品收率低。本发明通过酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离，然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。采用酶解可以适当降低盐浓度，减轻污染，降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用，每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。

本发明的有益效果是：本发明能解决单酶解工艺中酶解液活性低的问题，采用酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离，然后通过升温、树 脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。

具体实施方式

实施例1：

一种利用酶解法制备肝素钠的方法，通过下述步骤实现：

(1)酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜500kg，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.5％，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.8，加胰酶100g,加热至温度升至51℃，保温1小时后，过80目膜过滤，收集过滤液，加入2709碱性蛋白酶125g，保温1小时。

(2)升温:步骤(1)结束后，加热至温度升至63℃，保温5分钟，过80目膜过滤，收集过滤液。

(3)树脂吸附:步骤(2)结束后，将上述所得过滤液加入到吸附罐中，搅拌，降温至55℃，加500g树脂，保温55℃，搅拌吸附8小时，过滤，放出废液。

(4)洗脱:步骤(3)结束后，收集过滤树脂，各加饱和盐水694.4ml，保持55℃洗脱。

(5)醇沉:步骤(4)结束后，反复冲洗过滤后的树脂，将冲洗干净的树脂，倒入到洗脱器，收集洗脱液，将洗脱液过滤移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素钠。

(6)烘干:步骤(5)结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。

实施例2：

一种利用酶解法制备肝素钠的方法，通过下述步骤实现：