[发明专利]用于检测黄瓜棒孢叶斑病抗性位点的SNP标记方法在审
申请号: | 201610204267.1 | 申请日: | 2016-03-31 |
公开(公告)号: | CN105603119A | 公开(公告)日: | 2016-05-25 |
发明(设计)人: | 王惠哲;曹明明;邓强;李淑菊;杨瑞环;刘耕春 | 申请(专利权)人: | 天津科润农业科技股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人: | 陆艺 |
地址: | 300457 天津市滨海新区经济*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 检测 黄瓜 叶斑病 抗性 snp 标记 方法 | ||
技术领域
本发明涉及生物基因工程技术及分子生物学领域,提供了黄瓜棒孢叶斑病抗性的SNP标 记及其鉴定方法。可用于黄瓜棒孢叶斑病抗性的早期分子辅助选择,以提高育种效率。
背景技术
黄瓜(CucumisSativusL.)是葫芦科(Cucurbitaceae)甜瓜属(Cucumis)一年蔓生草本 植物,是全球普遍栽培的主要蔬菜作物,是中国栽培面积最大、种植范围最广的主要蔬菜作 物之一。黄瓜棒孢叶斑病[Cucumbertargetleafspot],又称“褐斑病”、“靶斑病”、“黄点子病”, 是一种世界性分布的真菌病害,近年来在我国严重暴发,是公认的危害黄瓜生产的一种仅次 于霜霉病的病害,已成为制约黄瓜生产的关键病害。黄瓜棒孢叶斑病在温室、露地都有发生, 且有不断加重的趋势,一旦发生常造成严重损失甚至毁园。北方地区以春、秋及越冬保护地 栽培发生普遍,南方则以春、秋露地发生较多。一般病田发病率为10%~25%,严重时可达 60%~70%,甚至100%,给种植户造成巨大经济损失。尤其在蔬菜高度产业化的今天,基于 传统的抗病育种模式严重制约着黄瓜品种的更新换代、生产产业化的步伐,利用现代生物技 术手段进行黄瓜抗病分子标记辅助育种势在必行。
随着分子生物学技术和遗传标记的应用和发展,为蔬菜育种学开辟了崭新的研究和应用 领域,它使蔬菜育种学家能直接从分子水平了解物种间的差异,也使育种过程更直观,目的性 更强。分子标记辅助选择(Molecularmarker-assistedselection,MAS)技术目前已成为育种研 究的热点和重要手段,将分子遗传技术应用于蔬菜抗病遗传育种的研究上,为材料的选择提 供了全新的手段。可在早代对表现优良的基因型进行直接选择,苗期即可在DNA水平上对目 标性状进行选择,抗病性鉴定可在室内完成,鉴定周期缩短到2天,而且稳定可靠,不受季 节、环境条件等因素的影响,可提高选择速度,增强选择的准确性和可靠性,加快育种进程, 因此具有广阔的应用前景。
随着蔬菜集约化生产和栽培技术的提高,黄瓜抗病育种已提到重要位置。黄瓜棒孢叶斑 病是黄瓜生产上的重要病害。查阅国内外文献,迄今为止,有关黄瓜棒孢叶斑病的SNP分子 标记辅助育种研究尚未见相关报道。因而将黄瓜抗棒孢叶斑病基因与不抗棒孢叶斑病的其它 品种的优良品质基因相结合,培育优良抗病的黄瓜新品种和创造黄瓜新种质是生产实践中亟 需解决的实际问题。筛选与黄瓜抗棒孢叶斑病基因紧密连锁的SNP标记,建立黄瓜抗棒孢叶 斑病分子标记辅助育种体系,将会推动传统的“经验育种”向高效的“精确育种”转变,提升育 种效率和技术水平,加速抗病育种的进程,为黄瓜遗传和育种工作奠定基础。
发明内容
本发明的目的在于提供了用于检测黄瓜棒孢叶斑病抗性的引物。
本发明的第二个目的是提供用于检测黄瓜棒孢叶斑病抗性位点的SNP标记方法。
本发明的技术方案概述如下:
用于检测黄瓜棒孢叶斑病抗性的引物,由SEQIDNo.1所示的正向引物,和SEQIDNo.2 所示的反向引物组成。
用于检测黄瓜棒孢叶斑病抗性位点的SNP标记方法,包括如下步骤:
(1)提取被检测样品黄瓜基因组DNA;
(2)以所述黄瓜基因组DNA为模板,以SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所述核苷酸序列 为上、下游引物,进行PCR扩增,获得319bp核苷酸序列,所述序列中包含四个与黄瓜棒孢 叶斑病抗病性相关基因紧密连锁的SNP位点或四个与黄瓜棒孢叶斑病感病性相关基因紧密连 锁的SNP位点;
(3)将步骤(2)获得的核苷酸序列进行测序,如果测序结果如SEQIDNo.3所示,为抗 棒孢叶斑病资源;如测序结果如SEQIDNo.4所示或同时具有SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所述 的核苷酸序列,为感棒孢叶斑病资源。
本发明的优点:
本发明的方法简单高效,结果可靠;所提供的分子标记可用于黄瓜棒孢叶斑病抗性的分 子辅助选择育种,可以为通过基因工程改良黄瓜品种的抗病性奠定基础,并为完善黄瓜分子 育种技术平台奠定坚实基础。
附图说明
图1是利用鉴定黄瓜棒孢叶斑病抗性的方法获得的与黄瓜抗棒孢叶斑病基因紧密连锁的 SNP标记和基因片段及感棒孢叶斑病基因紧密连锁的SNP标记和基因片段的比对图:
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