[发明专利]一种半月板支架的制备方法

权利要求书

1.一种半月板支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)选取牛的股骨或者胫骨，去除肌肉、骨膜和骨髓，得到股骨干中段和胫骨平台下方无松质骨的管状长骨部分，仅保留股骨干中段和胫骨平台下方无松质骨的管状长骨部分，用骨分割机将骨管切割成骨片，选取较平整骨片作为制备组织工程半月板的材料；

2)用1mol/L的RapidCal.Immuno脱钙液，进行为期90天的脱钙，用pH计检测脱钙液pH值大于1.5，更换脱钙液，每天用摇床搅动骨片及脱钙液，使骨片与脱钙液接触完全；

3)脱钙完全后，脱钙完全后用蒸馏水冲洗过夜，用pH计检测冲洗水pH值为中性后停止冲洗，再将骨片用双氧水冲洗，再用蒸馏水冲洗，冲洗后去除骨组织表面的杂质保留骨片备用；

4)先用夹具将柔软的脱钙骨片夹紧使其平整，然后连夹具一起放入-80℃低温冰箱中冻存72小时，从冰箱中拿出冷冻好的骨片立刻进行低温负压冷冻干燥；

5)冷冻干燥后的脱矿皮质骨片应平整且硬度可达到数控机床加工的要求，将骨片置于粗加工机床内进行修整磨平，随后使用高精度数控机床将修整后的骨片加工成脱矿皮质骨半月板支架，并测定支架的微观孔隙，膨胀标准，其中微观孔隙为5-50μm，膨胀标准为在8-12分钟膨胀达到饱和，以及使用纳米压痕仪器测定支架的纳米压痕强度和弹性模量，所述纳米压痕强度和弹性模量应符合正常动物或人半月板生物力学要求。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述的脱钙完全的标准为，更换脱钙液后，连续5天测定脱钙液pH值，与初始脱钙液的pH值差距低于0.5。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)所述的低温负压冷冻干燥包括以下步骤：

a)打开低温负压冷冻干燥机，冷冻温度-30℃时，打开真空泵；

b)当真空度低于10Pa时，将冻结的骨片放入干燥容器内进行冷冻干燥72h；

c)冷冻干燥完毕后，关闭冷冻干燥仪，取出样品。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括：

步骤6)所述步骤5)中脱矿皮质骨半月板支架的水合过程，水合过程为脱矿皮质骨半月板支架浸泡于水或者溶液中膨胀的过程，得到水合型脱矿皮质骨半月板支架。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述溶液为BMP-4的PBS溶液，所述BMP-4为骨形态发生蛋白-4，PBS为磷酸缓冲溶液。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，还包括：

步骤7)所述步骤6)中的水合型脱矿皮质骨半月板支架与促进软骨分化细胞体系共培养，所述支架和细胞体系共同组成半月板移植物。