[发明专利]利用TR-FRET高效筛选单克隆抗体阳性克隆的方法在审
| 申请号： | 201610176307.6 | 申请日： | 2016-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN105784657A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 鲁延军 | 申请（专利权）人： | 鲁延军 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N33/577 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200135 上海市浦东新区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 tr fret 高效 筛选 单克隆抗体 阳性 克隆 方法 | ||
1.一种利用TR-FRET高效筛选单克隆抗体阳性克隆的方法，其特征在于：在96孔或384孔筛选微 孔板内加入带有Tag的目的抗原蛋白，然后在该微孔板内加入样品、Anti-SpeciesIgG-Acceptor和 Anti-Tag-Donnor(或者Anti-SpeciesIgG-Donnor和Anti-Tag-Acceptor)，以同型IgG作为标准品制 作标准曲线，另设置空白样品孔作为阴性对照，室温孵育2-4h或4℃过夜孵育，用多功能酶标仪 读数，检测A665nm/A620nm的荧光比值。样品的A665nm/A620nm比值是阴性对照的 A665nm/A620nm的1.2倍以上，可认为该样品为阳性克隆，A665nm/A620nm比值越大，表明阳性 克隆表达的抗体越多。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：用于筛选的微孔板，包括：96孔板、384孔板和1536孔 板。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：目的抗原蛋白所带的Tag，包括且不仅限于：HIS、GST、 Flag、HA、cMYC、MBP、DNP、SNAP、CLIP、GFP、CFP、YFP、ACP、MCP和Halo。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：Donnor有两种，Eu(铕)或者Tb(铽)；Donnor的载体 有两种，Cryptate(穴状化合物)或者Chelate(螯合剂)；Acceptor有两种，XL665(APC)或者 d2。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：Anti-speciesIgG二抗的种属包括且不仅限于：Human(人)、 Mouse(小鼠)、Rat(大鼠)和Rabbit(兔)。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：Anti-Tag抗体所抗标签种类包括且不仅限于：HIS、GST、 Flag、HA、cMYC、MBP、DNP、SNAP、CLIP、GFP、CFP、YFP、ACP、MCP和Halo。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：Anti-Tag抗体的种属来源，包括且不仅限于：Rabbit、Goat、 Sheep、Donkey、Chicken、Rat、Mouse和Hamster。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：样品的A665nm/A620nm比值是阴性对照的 A665nm/A620nm的1.2倍以上，可认为该样品为阳性克隆。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：A665nm/A620nm比值越大，表明阳性克隆表达的抗体越 多。
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