[发明专利]一种线粒体靶向的亚硝酰氢分子荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种线粒体靶向的亚硝酰氢分子荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式如式(Ⅰ)所示：

所述的亚硝酰氢分子荧光探针的制备方法包括以下步骤：

1)将2′,4′-二羟基-2-苯酮苯甲酸与间羟基苯基哌嗪在三氟乙酸中，氮气保护，90℃加热回流，反应24h，反应结束后减压旋干溶剂得粗产品，然后用硅胶柱分离得到化合物MHN-1，结构式如下：

2)将步骤1)所得化合物MHN-1溶于乙腈中，加碳酸氢钠后再加入Fmoc-Cl，氮气保护，室温反应3h，反应完全后萃取、干燥、旋干并用硅胶柱分离得到化合物MHN-2，所述MHN-2和Fmoc-Cl的结构式分别如下：

3)将化合物二苯基磷苯甲酸溶于二氯甲烷中，加入二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶后在室温下搅拌20min后加入化合物MHN-2，在室温下搅拌8h，反应完全后萃取、干燥、旋干并用硅胶柱分离得到化合物MHN-3，结构式如下：

4)将化合物MHN-3溶于乙腈，然后逐滴加入15％的哌啶，在室温下搅拌30min，反应完全后，加入水淬灭反应，然后用二氯甲烷分两次萃取，依次用水、饱和食盐水洗涤后干燥、旋干溶剂，并用硅胶柱进行分离得到化合物MHN-4，结构式如下：

5)将化合物MHN-4溶于DMF中，加入K₂CO₃后在室温下搅拌10min，加入三苯基膦丁基溴后在室温下反应过夜，用TLC板检测反应，反应完全后分离提纯得到目标探针化合物Mito-HN。

2.根据权利要求1所述的亚硝酰氢分子荧光探针，其特征在于，所述步骤1)中硅胶柱分离洗脱剂配比为甲醇：二氯甲烷＝1:5。

3.根据权利要求1所述的亚硝酰氢分子荧光探针，其特征在于，所述步骤2)中萃取剂为乙酸乙酯，干燥剂为无水硫酸钠，硅胶柱洗脱剂配比为甲醇/二氯甲烷＝1:30。

4.根据权利要求1所述的亚硝酰氢分子荧光探针，其特征在于，所述步骤3)中萃取剂为乙酸乙酯，干燥剂为无水硫酸钠，硅胶柱洗脱剂配比为甲醇：二氯甲烷＝1:50。

5.根据权利要求1所述的亚硝酰氢分子荧光探针，其特征在于，所述步骤4)中干燥剂为无水硫酸钠，硅胶柱洗脱剂配比为甲醇/二氯甲烷＝1:30。

6.根据权利要求1所述的亚硝酰氢分子荧光探针，其特征在于，所述步骤5)中分离提纯的具体方法为：将反应产物用乙酸乙酯稀释，水洗2次，饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂得粗产品，并用硅胶柱进行分离，洗脱剂配比为甲醇：二氯甲烷＝1:20。

7.一种权利要求1所述的亚硝酰氢分子荧光探针的应用，其特征在于，所述探针可应用于水环境和生物细胞体系中HNO的传感检测；所述的传感检测包含荧光检测，目视定性检测，细胞成像检测。