[发明专利]一种检测人类MTHFR基因677位点的酶切方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因型检测领域，尤其涉及一种检测人类MTHFR基因677位点的酶切方法。

背景技术

亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-MethylenetetrahydrofolateReductase，MTHFR)是叶酸代谢 系统中的关键酶，主要作用是在叶酸代谢途径中将5,10-亚甲基四氢叶酸催化转化为5-甲基四 氢叶酸进入甲基通路，即：通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程间接为DNA甲基化和蛋白质 甲基化提供甲基，同时降低血液中的同型半胱氨酸水平。

MTHFR与多种疾病的发生密切相关，其基因缺陷将导致其编码的酶活性降低，引起叶 酸代谢障碍，产生高同型半胱氨酸血症，继而产生多种病症，其中以脑卒中以及新生儿神经 管缺陷最为严重。因此，检测MTHFR基因型，可以提示脑卒中风险性，同时还能指导孕妇 服用叶酸，降低唐氏综合征、唇腭裂、神经管缺陷等新生儿缺陷。

MTHFR基因具有11个编码外显子区域，目前可以通过MTHFR全基因编码区域测序法 筛查突变，为患者提供辅助诊断。其中MTHFR基因最常见的突变位点为C677T，C/C为正 常基因型，当个体为C/T基因型时，酶活性降低到60％左右；当个体为T/T基因型时，酶活 性降低到30％。由于T基因型在中国人群体中基因频率较高，接近50％，因此直接针对该特 定位点进行检测会节省成本，更快速为患者提供结果。如发现T/T基因型，将为此类高危人 群提供辅助诊断，提示个体发生脑卒中及新生儿缺陷的风险度，并同时指导叶酸和维生素用 药剂量，将有利于降低疾病发生。

已有检测手段包括基因芯片、直接测序、纳米技术、HRM技术等，虽然都能达到准确诊 断，但实验操作较复杂，费用高，需要相对高端设备仪器，如测序仪。因此限制了该检测项 目在临床的推广。

发明内容

解决的技术问题：为了获得一种快速、准确、结果易读且成本低的MTHFR基因677位 点基因型检测方法，本发明提供了一种检测人类MTHFR基因677位点的酶切方法。

技术方案：一种检测人类MTHFR基因677位点的酶切方法，包含以下步骤：

(1)提取受试者血液基因组DNA；

(2)以人类MTHFR基因677位点附近序列设计特异性引物，

上游引物：GATGCTTGTTGGCCAAAGTACAAC，

下游引物：GATTTGCTTGGCTGCTCAAGG；

(3)使用步骤(2)中的特异性引物，以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，进行PCR 扩增反应，获得扩增产物，电泳检测扩增产物；PCR扩增产物的片段大小为727bp；

其中野生型的扩增片段为：