[发明专利]一种高转化效率大肠杆菌热激感受态细胞制备方法在审
| 申请号： | 201610135373.9 | 申请日： | 2016-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN105670970A | 公开（公告）日： | 2016-06-15 |
| 发明（设计）人： | 佘茂云;殷桂香;徐倩倩 | 申请（专利权）人： | 佘茂云 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 230031 安徽省合肥市庐阳*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转化 效率 大肠杆菌 感受态 细胞 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种高效、稳定的制备大肠杆菌热激感受态细胞方法，是通过室温进行大肠杆菌菌 液扩繁的培养模式，并通过梯度递减方式进行菌液“收集-漂洗”操作，最后用添加7%DMSO的 SB溶液对制备的热激感受态细胞进行超低温（-80℃）保存。
2.根据权利要求1所述的培养技术，其特征在于：室温过夜扩繁大肠杆菌菌种及梯度递 减漂洗大肠杆菌细胞。
3.根据权利要求1所述的培养技术，LB液体培养基成分：10g/L胰蛋白胨；5g/L酵母提 取物；10g/L氯化钠；调pH=7.0；LB固体培养基成分：在LB液体培养基基础上添加15g/L琼 脂粉；SB溶液组成为：10mMPIPES，sigma货号：P6757；55mMMnCl2；15mMCaCl2；pH=6.7， 0.22μm孔径的无菌滤膜过滤灭菌后4℃保存备用。
4.根据权利要求1所述的培养技术，用于制备大肠杆菌热激感受态菌株为DH5α。
5.根据权利要求1所述的培养技术，用于制备大肠杆菌热激感受态菌种为直接从-80 ℃取出并在解冻前迅速划平板，避免反复冻融。
6.根据权利要求1所述的培养技术，新制备的大肠杆菌热激感受态细胞进行转化时，用 量为一次一管。
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