[发明专利]一种检测人EGFR、KRAS、BRAF基因突变的引物组合及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测人EGFR、KRAS、BRAF基因突变的ARMS引物，其特征在于，所述ARMS 引物的序列如SEQIDNO.1至SEQIDNO.31所示。

2.权利要求1所述的ARMS引物在制备检测人EGFR、KRAS、BRAF基因突变的试剂 盒中的应用。

3.一种检测人EGFR、KRAS、BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，包括：权利要求 1所述的ARMS引物和用于扩增第一内参的引物；

所述第一内参为GAPDH基因，用于扩增第一内参的引物序列如SEQIDNO.32和SEQID NO.33所示。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中，还包括如下物质中的至少一 种：DNA聚合酶、DNA聚合酶缓冲液、SYBR-Green-I和4种dNTP混合物。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为TaqHSDNA聚合酶。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒中还包括用于对样品进行桑格测序 的试剂，所述试剂中包含用于扩增EGFR、KRAS和BRAF基因中任意一个、两个或全部的 一个或多个外显子区域的扩增引物对。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增引物对包括：用于扩增EGFR基 因的外显子18的区域的扩增引物对，如SEQIDNO.34和SEQIDNO.35所示；

用于扩增EGFR基因的外显子19的区域的扩增引物对，如SEQIDNO.36和SEQID NO.37所示；

用于扩增EGFR基因的外显子20的区域的扩增引物对，如SEQIDNO.38和SEQID NO.39所示；

用于扩增EGFR基因的外显子21的区域的扩增引物对，如SEQIDNO.40和SEQID NO.41所示；

用于扩增KRAS基因的外显子2的区域的扩增引物对，如SEQIDNO.42和SEQIDNO.43 所示；

用于扩增KRAS基因的外显子3的区域的扩增引物对，如SEQIDNO.44和SEQIDNO.45 所示；

用于扩增KRAS基因的外显子4的区域的扩增引物对，如SEQIDNO.46和SEQIDNO.47 所示；

用于扩增BRAF基因的外显子15的区域的扩增引物对，如SEQIDNO.48和SEQID NO.49所示。

8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述用于对样品进行桑格测序的试剂中， 还包含对EGFR、KRAS和BRAF基因扩增产物进行测序的测序引物；其序列分别如SEQID NO.34、SEQIDNO.37、SEQIDNO.39、SEQIDNO.41、SEQIDNO.43、SEQIDNO.44、SEQ IDNO.46和SEQIDNO.48所示。

9.权利要求3-8任一项所述的试剂盒在制备检测或辅助检测人EGFR、KRAS、BRAF基 因突变的产品中的应用。

10.一种非诊断目的的利用上述试剂盒检测人EGFR、KRAS、BRAF基因突变的方法， 其特征在于，采用权利要求1所述的ARMS引物对待测样品的目的基因进行PCR扩增，在 81℃采集荧光信号，根据Ct值对检测结果进行判读，若ΔCt-1的ΔCt-2差别在1个循环内， ΔCt-2>8，则检测结果为阴性；

若ΔCt-1>ΔCt-2，ΔCt-2<8，则检测结果为阳性。