[发明专利]麻疹病毒检测试剂盒及使用方法

说明书

技术领域

一种麻疹病毒免疫荧光法检测试剂盒及其使用方法，属于医学检验技术领域。

背景技术

麻疹病毒(measlesvirus)是儿童常见的一种急性传染病，其传染性很强，以皮丘疹、发热及呼吸道症状为特征，我国自60年代初应用减毒活疫苗以来，儿童的发病率显著下降，麻疹是儿童最常见的急性呼吸道传染病之一，其传染性很强，临床上以发热、上呼吸道炎症、眼结膜炎等而以皮肤出现红色斑丘疹和颊粘膜上有麻疹粘膜斑及疹退后遗留色素沉着伴糠麸样脱屑为特征。我国自1965年，开始普种麻疹减毒活疫苗后已控制了大流行，麻疹病毒为球形或丝形，直径约120nm～250nm，核心为单负链RNA，不分节段，基因组全长约16kb，基因组有N、P、M、F、H、L6个基因，分别编码6个结构和功能蛋白：核蛋白(nucleoprotein，NP)、磷酸化蛋白(phosphoprotein，P)、M蛋白(membraneprotein，M)、融合蛋白(fusionprotein，F)、血凝素蛋白(hemagglutinin，H)和依赖RNA的RNA聚合酶(largepolymerase，L)，核衣壳呈螺旋对称，外有包膜，表面有两种刺突，即HA和溶血素(haemolyxin，HL)，它们的成分都是糖蛋白，但性质各异，HA只能凝集猴红细胞，还能与宿主细胞受体吸附，HL具有溶血和使细胞发生融合形成多核巨细胞的作用，HA和HL均有抗原性，产生的相应抗体具有保护作用。临床实验室检测方法有，取患者发病早期的血液、咽洗液或咽拭子经抗生素处理后，接种于人胚肾、猴肾或人羊膜细胞中培养，用间接荧光抗体法或ELISA检测IgM抗体，用荧光标记抗体检查患者卡他期咽漱液中的粘膜细胞有无麻疹病毒抗原，用核酸分子杂交技术也可检测细胞内的病毒核酸。

发明内容

本发明为了解决麻疹病毒早期诊断、简便、快速，结果易于判读而提供一种麻疹病毒免疫荧光检测试剂盒。免疫荧光法简便，快速，灵敏度高，但目前的检测方法阳性率低，结果不易判读，标本处理不当，易出现假阳性及假阴性，需要进行较大改进，患者咽部上皮细胞表面粘附有大量的粘液，不易洗涤，很难分离，N-乙酰-L-半胱氨酸药物为粘液溶解剂，临床上常用于呼吸科病人降低痰液的粘稠度而易于排出，本品的巯基(-SH)结构可使粘蛋白的双硫(-S-S-)结构断裂，降低痰粘度，在本发明中，经N-乙酰-L-半胱氨酸作用使咽部上皮细胞从粘液中分离开，上皮细胞膜穿透剂为非离子表面活性剂，组成为聚氧乙烯表面活性剂0.18％，有机季铵盐0.08％，在本发明中，它可穿透细胞膜使生物化抗体、链霉亲和素偶联异硫氰酸荧光素和封片剂中甘油介质进入细胞内，进行免疫荧光法测定，封片剂甘油不仅能使细胞湿润，保持长久荧光，而且进入细胞能使细胞内结构清亮，增加对比度，更能增加荧光与背景的对比度，将生物素-链霉亲和素系统引入荧光检测系统，能明显提高敏感性及特异性，本发明能显著提高检测方法的灵敏度及特异性。

本发明是按以下技术方案实现的：

一种麻疹病毒免疫荧光法检测试剂盒，它包括盒体与盒盖，而在盒体一侧长边内形成有插孔的试剂架上，分别容纳粘液溶解剂，细胞膜穿透剂，生物素化抗麻疹病毒抗体IgM，链霉亲和素偶联异硫氰酸荧光素，封片剂，盒体内的纵向分隔板一侧形成收容磷酸盐(PBS)缓冲液瓶的空间，而分隔板另一侧形成存储生物玻片的空间，所述生物玻片上按一定间距形成有反应凹槽。

这样设计的本发明具有的优点是：所用检测时使用的试剂，生物玻片等均集中在一起，便于检测，操作简单，节省人力和时间，检测时间约为2.5小时，提供了工作效率。

附图说明

图1本发明试剂盒立体结构示意图。

图2本发明中生物玻片结构示意图。

图3是应用本发明测定方法阳性荧光图。

图4是应用原有测定方法阳性荧光图。

图中：1.盒体2.盒盖

3.插孔4.试剂架

5.粘液溶解剂试剂瓶6.细胞膜穿透试剂瓶

7.生物素化抗麻疹病毒抗体试剂瓶

8.链霉亲和素偶联异硫氰酸荧光素试剂瓶

9.封片剂瓶10.磷酸盐缓冲液试剂瓶

11.生物玻片11a.11b.11C生物反应区

下面结合附图及实施例对本发明进行详细的说明