[发明专利]一种

说明书

本发明属于正电子发射计算机断层(PET)显像技术领域，具体涉及一种¹⁸F快速标记Cys‑Annexin V的方法，以及获得的¹⁸F‑Al‑NOTA‑Cys‑Annexin V在检测细胞凋亡方面的应用，本发明所述的¹⁸F快速标记Cys‑Annexin V的方法，首次采用¹⁸F‑Al‑NOTA‑Maleimide标记Cys‑Annexin V，该标记方法所用标记时间短，标记率高，并可实现¹⁸F定位标记Cys‑Annexin V，且¹⁸F‑Al‑NOTA‑Cys‑Annexin V与PS保持良好的亲和性，作为PET显像剂可实现良好的显像效果，具有较为理想的显像特异性。

技术领域

本发明属于PET显像领域，具体涉及一种¹⁸F快速标记Cys-Annexin V 的方法及其应用。

背景技术

细胞凋亡(Apoptosis)又称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death， PCD)，是不同于坏死和意外死亡的、由基因调控的细胞主动性死亡过程。作为细胞生命周期中的重要组成部分，细胞凋亡的过程中伴随着一系列的生物分子及细胞形态学的改变。其中，细胞膜脂质双层中的磷脂酰丝氨酸(PS)由细胞膜内层翻转至外层，进而暴露于细胞表面，是细胞凋亡早期事件，发生在凋亡细胞形态学的改变之前，也是凋亡级联反应的初始事件。 PS的外翻作为凋亡细胞被吞噬细胞识别的标志，将会进一步引起胞浆的皱缩、染色质的浓集及核内DNA降解等现象。因此，外翻的PS作为凋亡检测的靶点，具有较高的时效性，可早期检测细胞凋亡。目前，在利用检测外翻的PS来获知细胞凋亡情况的技术中，正电子断层显像(positron emission tomography，PET)是常用的技术手段之一，其主要是利用¹¹C、¹³N、¹⁵O或¹⁸F等放射性核素标记的、可与PS特异性结合的物质作为显像剂，通过显像剂在代谢中聚集与分布的呈像，来获知细胞凋亡的情况，从而达到诊断的目的。

在可与PS特异性结合的物质中，以Annexin V作为PET显像剂的相关技术具有良好的应用前景。Annexin V(膜联蛋白V，又称Annexin A5 和AnxA5)是一种人体内源性蛋白，属于Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白家族，含有319各氨基酸，包括70-80个氨基酸重复单元，分子量约为35kD。研究表明，Annexin V与PS特异性结合的亲和力高达10^-9mol/L，其在被放射性核素标记、进而作为PET显像剂进行体内细胞凋亡的显像时，可实时监测体内凋亡的发生并且可实现细胞凋亡的活体无创显像，因此，已成为监测活体细胞凋亡领域的研究热点。在对Annexin V进行正电子核素标记的技术中，以¹⁸F标记Annexin V的¹⁸F-SFB-AnnexinV最为常见。但是，由于¹⁸F-SFB-Annexin V是通过功能基团(¹⁸F-SFB)连接Annexin V中赖氨酸残基上的氨基，进而标记上放射性核素的，而一分子的Annexin V蛋白中含有21个赖氨酸残基，因此，¹⁸F-SFB标记在Annexin V上的位置是不确定的，甚至标记上的个数也不确定。另外，Annexin V中的一些赖氨酸残基处在Annexin V与PS结合的活性区域附近，¹⁸F-SFB与该处的赖氨酸残基连接则会影响Annexin V与PS的亲和性。这些均会导致¹⁸F-SFB-Annexin V在细胞凋亡显像时特异性较低。