[发明专利]一种诺丽鞘氨醇单胞菌保藏培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物菌种保藏领域，具体是一种诺丽鞘氨醇单胞菌保藏培养基及其制备方法。

背景技术

诺丽（海巴戟天）是早期波利尼西亚人带到夏威夷最重要的植物之一，是古代夏威夷人最常用的中药材。诺丽及其相关提取物在抗肿瘤、改善免疫调节功能、减少肝损伤等方面发挥积极作用。特别是采用诺丽果实单独或与其他药物相结合作为许多疾病如糖尿病、高血压和癌症治疗的补救办法。已有科学研究证实，诺丽果汁可以延长Lewis肺癌小鼠的寿命，通过刺激免疫系统抑制肿瘤细胞的生长。诺丽果汁的醇沉物(Nonippt)具有抗癌抗菌素活性。然而，目前对诺丽的研究主要集中在种植、栽培、产品研发、化学成分和毒理的研究，对诺丽相关微生物的研究尚属空白。内生菌及其生命过程是影响植物生长和功效成分累积至关重要的因素，因此系统地研究诺尼果内生菌具有重要意义。

诺丽鞘氨醇单胞菌是分离自诺丽茎的一种内生菌新种，属于鞘氨醇单胞菌属。这是一类丰富的新型微生物资源，可用于芳香化合物的生物降解。该属菌株凭借自身的高代谢能力与多功能的生理特性，在环境保护及工业生产方面具有巨大的应用潜力。但是由于对鞘氨醇单胞菌的认识较晚，该菌的生态价值及经济价值很少被关注，对其的研究也停留在初级阶段。本发明为后续的应用研究提供了基础。

发明内容

本发明的目的是要提供一种制作简便、保藏时间较长、适合诺丽鞘氨醇单胞菌保藏的培养基及其制备方法。

首先提供一种诺丽鞘氨醇单胞菌保藏培养基，其培养基配方为：营养肉汤干粉0.8%，琼脂0-0.5%，用1-5%诺丽干果水溶液定容至1000ml，调节pH至4.0-6.0。

配方中所含有的营养肉汤干粉能满足诺丽鞘氨醇单胞菌的基本的生长需要，诺丽干果水溶液可有效阻止菌体自溶，使其在4℃的保存期由15d延长至70d。

其次给出上述诺丽鞘氨醇单胞菌保藏培养基的制备方法：按比例称取诺丽干果，加入1000ml水煮沸10min后过滤除渣，补水至1000ml；然后加入营养肉汤干粉和琼脂，加热煮沸溶解后调节pH至4.0-6.0，分装后121℃灭菌20min。

所述的培养基接种、培养后在4℃保藏。保藏在4℃的冰箱内，可有效降低诺丽鞘氨醇单胞菌新陈代谢的速率，保藏时间较长，减少了由于菌种频繁传代导致的退化变异等问题。

利用本发明的保藏培养基进行培养后，可以有效地延长在4℃条件下的保藏时间，最长可达70d。相比普通的营养琼脂培养基提高了3.7倍，达到了长期保藏的目的，同时制作简便且成本低廉，达到了本发明的目的。

具体实施方式

实施例一

培养基配方为：营养肉汤干粉0.8%，用1%诺丽干果水溶液定容至1000ml，调节pH至4.0-6.0。

取10.0g诺丽干果加水1000ml煮沸10min后，补水至1000ml，加入8.0g营养肉汤干粉，煮沸溶解之后调节pH至4.0-6.0，然后分装并于121℃灭菌20min。

用接种环从种子斜面挑取一环接种，培养2d后保藏在4℃冰箱内。保藏70d后取出，培养基呈棕黑色，试管底部沉积大量灰白色菌体，摇匀后沾取一接种环菌液划线至新鲜的固体培养基上，培养2d后划线处长出灰白色菌落，说明该培养基保藏的诺丽鞘氨醇单胞菌仍具有活性。

实施例二

培养基配方为：营养肉汤干粉0.8%琼脂0.5%，用5%诺丽干果水溶液定容至1000ml，调节pH至4.0-6.0。

取50.0g诺丽干果加水1000ml煮沸10min后，补水至1000ml，加入8.0g营养肉汤干粉和5.0g琼脂，煮沸溶解之后调节pH至4.0-6.0，然后分装并于121℃灭菌20min。

用接种针从种子斜面挑取菌体进行穿刺接种，培养2d可见菌体沿穿刺线生长，然后保藏在4℃冰箱内。保藏70d后取出，用接种环取穿刺线上菌体划线至新鲜的固体培养基上，培养2d即长出灰白色菌落表明菌体仍具有活性。

采用本发明实施例一和二的方法制备的保藏培养基可有效提高保藏时间和保持菌种活力，比传统的营养琼脂培养基上保藏的15d提高了3.7倍，说明该培养基保藏效果良好。