[发明专利]一种防治鸡心包积液-肝炎综合征生物兽药的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物兽药技术领域，尤其是一种防治鸡心包积液-肝炎综合征生物兽 药的制备方法。

背景技术

心包积液-肝炎综合征（Hydropericardiumhepatitissyndrome,鸡心包积液-肝 炎综合征）,典型症状是3-6周龄肉鸡突发发病，并伴有典型的心包积液和肝炎症状，也可见 于肉种鸡和蛋鸡。研究认为，血清4型禽腺病毒（Fowladenovirusserotype4，FAV4）是引 起的本病的病原之一，发现患病鸡肝细胞内有嗜碱性核内包涵体，并且肝脏匀浆经无菌处 理后，可以复制出相同的病症。在电子显微镜下从病鸡肝中观察到呈二十面体的病毒，并且 分离到血清型不同的多株腺病毒。但有研究指出，除了FAV4外，有其他因子与本病有关，这 些因子必须与FAV4共同作用才能复制出典型症状。

2005年12月1日，农业部发布“关于清查金刚烷胺等抗病毒药物的紧急通知”，金 刚烷胺、金刚乙胺、阿昔洛韦、吗啉(双)胍(病毒灵)、利巴韦林等及其盐、酯的单、复方制剂 等将不能再作为兽用抗病毒药物使用。

目前，我国养殖业对于病毒病的控制，主要以疫苗免疫接种为主。比如新城疫、禽 流感、传染性支气管炎等病毒病，均是采取一定的免疫程序来预防该类疾病的发生。而一旦 因为免疫抑制或毒株变异等原因导致免疫失败，从而发生此类疫病流行的话，则会造成极 大的经济损失。鸡心包积液-肝炎综合征，是我国各地新近流行的一种以FAV4为主要致病原 的“老病”，该病最早在1987年在巴基斯坦流行过。相对于禽流感、新城疫等一类疫病来说， 鸡心包积液-肝炎综合征这些年的发病情况并不严重，因此，目前也没有该病的商品疫苗销 售，更没有特异性兽用药能够防治鸡心包积液-肝炎综合征。然而，从去年3月份山东、江苏、 辽宁、河南等地陆续在肉食鸡群中流行，部分蛋鸡群散发。发病肉鸡群多于3周龄开始死亡， 4～5周龄达高峰，高峰持续期4～8天，5～6周龄死亡减少。病程8～15天，死亡率达20～80%， 一般在30%左右。目前临床治疗方案是具有我国特色的保守疗法：中兽药制剂（抗病毒）、保 肝护肾及抗生素（控制继发感染）疗法。然而，从临床效果及成本来看，现有的治疗方案不仅 治疗成本高昂（0.4-0.6元/羽），而且因为这种治疗方案的中兽药抗病毒制剂（比如黄芪多 糖制剂）对鸡心包积液-肝炎综合征不具有针对性，其治疗成本高、效果差。

发明内容

为了克服现有防治鸡心包积液-肝炎综合征生物兽药技术存在的不足，本发明提 供了一种防治鸡心包积液-肝炎综合征的生物兽药的制备方法，解决目前没有合适的治疗 鸡心包积液-肝炎综合征针对性兽用药物、现有流行的治疗方案成本高、效果差的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是，一种防治鸡心包积液-肝炎综合征 生物兽药的制备方法，其步骤是：

（1）抗原的制备

A:组织匀浆液的制备：收集病患鸡的肝脏，用生理盐水洗2～3次，除去血液，剥除表面 的结缔组织的脂肪。剪碎，用生理盐水反复洗涤至无血色止，然后再加1：1-10重量比的冷生 理盐水，用组织捣碎机10000-15000r/min上下研磨15-30分钟，制成组织匀浆液；

所述病患鸡是指剖检可见典型鸡心包积液-肝炎综合征症状的鸡，尤其是指同时可见 心包积液和肝炎症状的鸡；

所述病患鸡的肝脏可以是淋巴组织；

B、冻融、过滤、除菌：组织匀浆液反复冻融3次后，离心后收集上清液，0.22μm微孔过滤 除菌；

C、增殖：将步骤B所得上清液做5-15倍稀释，接种10日龄鸡胚尿囊腔内，每枚鸡胚接种 0.2ml，37℃孵化4d后收获尿囊液；

上述B、C步骤可以是组织匀浆液反复冻融3次后，加入1倍生理盐水稀释混匀，再加入青 链霉素双抗溶液，终浓度为200IU/ml；

可以进一步对第（1）步骤的抗原进行纯化，方法是：将收获尿囊液，盲传3代，收集尿囊 液，即为纯化的病毒抗原；

（2）抗原EID50的测定

将所制得的抗原，一次做10倍稀释，进行鸡胚尿囊腔接种，每个稀释度接种0.1ml，做9 个重复，同时设正常胚对照。置于37℃孵化48小时，弃掉24h内死亡胚，收获24h后死亡胚及 48h活胚的尿囊液，进行HA价的测定。按照Reed-muench方法计算EID50；

（3）制备灭活疫苗