[发明专利]快速检测猪伪狂犬病毒的实时荧光RPA试剂盒、试纸条RPA试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种用于快速检测猪伪狂犬病毒的实时荧光RPA检测试剂盒，其特征在于包括有一对引物和一条探针，

其中，所述的一对引物和一条探针的序列如下所示：

上游引物：5’-TACTTTATCGAGTACGCCGACTGCGACCCCAGGCA-3’；

下游引物：5’-ACCATGAAGTCGGTGAGGATGTTCACGCCGTCGAC-3’；

探针：5’-CGATGTGGTGGACCCCGTCCGCGGACTACA

-FAM-dT-THF-BHQ1-dT-TCCCCACGGAGGACG-P-3’。

2.如权利要求1所述的实时荧光RPA检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还包括水解缓冲液，醋酸镁以及ddH₂O。

3.如权利要求1或2所述的实时荧光RPA检测试剂盒，其特征在于用于检测猪伪狂犬病毒时，反应体系如下：14.75μL的水解缓冲液，1.05μL的10μM上游引物，1.05μL的10μM下游引物，0.075μL的10μM探针，2μL的病毒DNA模板，4.825μL的ddH₂O以及1.25μL的280mM醋酸镁；

扩增反应在温度设定为37-39℃的实时荧光定量PCR仪中进行，反应时间为20min-1h，结束后通过Mx3005P软件对结果进行分析。

4.如权利要求3所述的实时荧光RPA检测试剂盒，其特征在于扩增反应在温度设定为39℃的实时荧光定量PCR仪中进行，反应时间为20min，结束后通过Mx3005P软件对结果进行分析。

5.权利要求1-4任一项所述的实时荧光RPA检测试剂盒在制备检测猪伪狂犬病毒试剂中的用途。

6.一种用于快速检测猪伪狂犬病毒的试纸条RPA检测试剂盒，含有侧流层析试纸条，其特征在于还包括有一对引物和一条探针，

其中，所述的一对引物和一条探针的序列如下所示：

上游引物：5’-TACTTTATCGAGTACGCCGACTGCGACCCCAGGCA-3’；

下游引物：5’-biotin-ACCATGAAGTCGGTGAGGATGTTCACGCCGTCGAC-3’；

探针：5’-FAM-GATGTGGTGGACCCCGTCCGCGGACTACAT

-THF-TTCCCCACGGAGGAC-P-3’。

7.如权利要求6所述的试纸条RPA检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还包括水解缓冲液，醋酸镁以及ddH₂O。

8.如权利要求6或7所述的试纸条RPA检测试剂盒，其特征在于用于检测猪伪狂犬病毒时，反应体系如下：14.75μL的水解缓冲液，1.05μL的10μM上游引物，1.05μL的10μM下游引物，0.3μL的10μM探针，2μL的病毒DNA模板，4.6μL的ddH₂O以及1.25μL的280mM醋酸镁；

扩增反应在温度设定为39℃的水浴锅中进行，反应时间为15min-30min，结束后使用侧流层析试纸条对结果进行检测。

9.如权利要求8所述的试纸条RPA检测试剂盒，其特征在于扩增反应在温度设定为39℃的水浴锅中进行，反应时间为20min，结束后使用侧流层析试纸条对结果进行检测。

10.权利要求6-9任一项所述的试纸条RPA检测试剂盒在制备检测猪伪狂犬病毒试剂中的用途。