[发明专利]一种羊巩膜胶原蛋白的提取方法、眼用凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种羊巩膜胶原蛋白眼用凝胶，其特征在于：包括羊巩膜胶原蛋白、硼 酸、硼砂、聚乙烯醇、氯化钠、吐温、注射用水、防腐剂；其中，羊巩膜 胶原蛋白的质量分数为80％～90％，防腐剂的质量分数为0.01％～2％，硼 酸和硼砂的质量分数为0.5％～2％，聚乙烯醇的质量分数为0.5％～2％，氯 化钠的质量分数为0.5～2％，吐温质量的分数为0.3％～2％，注射用水的质 量分数为余量。

2.如权利要求1所述的羊巩膜胶原蛋白眼用凝胶，其特征在于，所述羊巩膜 胶原蛋白的提取方法包括以下步骤：

1)将离体的羊眼球去除巩膜以外的其他部分，分离出羊巩膜；

2)将步骤1)中得到的羊巩膜切成羊巩膜片；用生理盐水浸泡清洗羊巩膜 片，去除血清和脂肪后，用蒸馏水漂洗，在无菌环境下晾干，得到羊巩 膜干片；

3)取所述羊巩膜干片，加入胃蛋白酶，所述胃蛋白酶的质量为羊巩膜干片 质量的10％，放入匀浆机内进行匀浆后，放在磁力搅拌机上搅拌提取 24h～26h；

4)用高速冷冻离心机在温度为0～4℃，转速为6000转/min的条件下离心 10～30min，取第一次上清溶液，并得到沉淀；

5)将步骤4)中离心得到的沉淀加入0.5mol/L乙酸悬浮溶解，放在磁力搅 拌机上搅拌提取24h～26h，用高速冷冻离心机在温度为0～4℃，转速 为6000转/min的条件下离心10～30min，取第二次上清溶液；

6)合并所述第一次上清溶液和所述第二次上清溶液，缓慢加入碱性溶液调 节pH值至5，滤掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体粉末，缓 慢搅拌，在4℃下，静置8～14小时形成羊巩膜胶原蛋白原液；

7)将羊巩膜胶原蛋白原液放置于高速冷冻离心机中，在温度为0～4℃， 转速为6000转/min，时间为10～30min的条件下离心，取沉淀，用稀 醋酸溶解，将溶解液装入透析袋中，分别用梯度浓度的乙酸溶液各透析 24～26小时，然后用蒸馏水透析24～26小时，每24～26小时更换透 析液两次，得到羊巩膜胶原蛋白水溶液；

8)将羊巩膜胶原蛋白水溶液在-20℃～-80℃下冷冻干燥，制得到羊巩膜胶 原蛋白。

3.如权利要求2所述的羊巩膜胶原蛋白眼用凝胶，其特征在于，步骤6)中所 述碱性溶液为6mol/L的NaOH或6mol/L的KOH。

4.如权利要求1所述的羊巩膜胶原蛋白眼用凝胶，其特征在于：所述聚乙烯 醇为增稠剂，所述硼酸、硼砂为离子缓冲对，所述氯化钠为渗透压调节 剂，所述吐温为增溶剂，所述吐温为吐温-80，所述防腐剂为羟苯乙酯、对 羟基苯甲酸丙酯或苯扎溴铵。

5.一种如权利要求1所述的羊巩膜胶原蛋白眼用凝胶的制备方法，其特征在 于：该方法在无菌条件下进行，其制作步骤是：

1)取质量分数为0.5％～2％的硼酸和硼砂、质量分数为0.5％～2％的聚乙烯 醇，质量分数为0.5％～2％的氯化钠，质量分数为0.3％～2％的吐温，质量 分数为0.01％～2％的防腐剂、质量分数为80％～90％的羊巩膜胶原蛋白， 以及余量的注射用水备用；

2)称取硼酸、硼砂、苯扎溴铵溶于75～85℃的注射用水中，加吐温，搅 匀；

3)另取羊巩膜胶原蛋白溶于聚乙烯醇中，加入上述溶液，边加边搅拌，混 合均匀，放冷，用微孔滤膜为孔径0.22μm的滤膜过滤，自滤器上添加注射 用水，经100℃流通蒸汽灭菌30min，无菌分装制成羊巩膜胶原蛋白眼用凝 胶。

6.如权利要求5所述的羊巩膜胶原蛋白眼用凝胶的制备方法，其特征在于： 所述羊巩膜胶原蛋白眼用凝胶为白色凝胶状，PH值为6.5～7.4。

7.如权利要求5所述的羊巩膜胶原蛋白眼用凝胶的制备方法，其特征在于： 所述聚乙烯醇为增稠剂，所述硼酸、硼砂为离子缓冲对，所述氯化钠为渗 透压调节剂，所述吐温为增溶剂，所述吐温为吐温-80，所述防腐剂为羟苯 乙酯、对羟基苯甲酸丙酯或苯扎溴铵。