[发明专利]辣椒叶片中类胡萝卜素组分的提取及其含量的定量检测方法

权利要求书

1.辣椒叶片中类胡萝卜素含量的定量检测方法，其特征在于：步骤如下：

（1）提取辣椒叶片中类胡萝卜素；所述提取方法为：

A、液氮研磨：在新鲜辣椒叶片中加入液氮充分研磨至粉末状；

B、皂化：在步骤A中加入质量浓度为15-30%的KOH-甲醇皂化液，于40-80℃皂化20-60min；

C、提取：在步骤B制备的皂化的辣椒叶片中加入丙酮-乙酸乙酯的混合提取溶剂进行超声提取，得到类胡萝卜素粗提液；所述辣椒叶片与混合提取溶剂的比值为1g:(2-8)ml；所述混合提取溶剂中丙酮与乙酸乙酯的体积比为1:2；

D、将步骤C得到的类胡萝卜素粗提液进行后处理，得到含有类胡萝卜素的溶液；

（2）用丙酮将得到的含有类胡萝卜素的溶液定容至10mL，过0.22μm有机滤膜，得到辣椒叶片类胡萝卜素待测样品；所述丙酮为色谱纯；

（3）依据下述色谱条件对待测样品进行高效液相色谱测试：色谱柱为Welch Ultimate C30高效液相色谱柱，规格为250mm×4.6mm，填料直径为5μm；流动相的柱流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长为450nm；

流动相组分为：A：乙腈，B：水，C：甲基叔丁基醚和甲醇的混合液，其中，甲基叔丁基醚与甲醇体积比为1:1，D：乙酸乙酯；

流动相梯度洗脱程序为：0min～6min：B由0线性增加到10%，C保持0，D由0线性增加到10%；6min～12min：B由10%线性增加到15%，C保持0，D由10%线性增加到20%；12min～20min：B由15%线性递减到0，C保持0，D由20%线性递减到10%；20min～22min：B由0线性增加到5%，C由0线性增加到40%，D由 10%线性递减到5%；22min～30min：B由5%线性递减到0，C由40%线性增加到50%，D由5%线性增加到20%；30min～35min：A线性增加到100%；

（4）根据各单个标准品溶液中类胡萝卜素组分的保留时间，确定辣椒叶片类胡萝卜素待测样品中10种类胡萝卜素的保留时间，进一步确定各种类胡萝卜素组分的峰面积，将各种类胡萝卜素组分的峰面积分别代入相应的线性回归方程中，得到辣椒叶片中相应组分的类胡萝卜素的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在提取辣椒叶片中类胡萝卜素的方法的步骤 A中，在研磨前还加入抗氧化剂2,6-二叔丁基对甲酚。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在提取辣椒叶片中类胡萝卜素的方法的步骤 B中，所述KOH-甲醇皂化液的质量浓度为20%。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述辣椒叶片与KOH-甲醇溶液的用量比值为1g：（2-6）ml。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述辣椒叶片与KOH-甲醇溶液的用量比值为1g：4ml。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述皂化条件为：55℃皂化30min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述辣椒叶片与混合提取溶剂的比值为1g:8ml。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述超声提取的时间为10-50min，超声温度为30℃。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述超声提取的时间为40min。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4）中所述后处理为将类胡萝卜素粗提液4℃下离心15min，取上清液，将上清液45℃旋转蒸发浓缩至近干。

11.根据权利要求1-10任一项所述的方法，其特征在于：所述单个标准品溶液中类胡萝卜素组分的保留时间分别为：八氢番茄红素保留时间33.168min、番茄红素保留时间29.231min、α-胡萝卜素保留时间34.971min、叶黄素保留时间19.183min、环氧叶黄素保留时间25.026min、β-胡萝卜素保留时间36.067min、玉米黄素保留时间20.398min、单环氧玉米黄素保留时间17.950min、新黄质保留时间9.189min、紫黄质保留时10.473min。

12.根据权利要求1-10任一项所述的方法，其特征在于：所述各种类胡萝卜素组分的线性回归方程的获取方法为：

（1）制备系列浓度的类胡萝卜素标准样品；

（2）按照权利要求1中步骤（3）所示色谱条件进行高效液相色谱测试；

（3）根据各单个标准品溶液中类胡萝卜素组分的保留时间，确定系列浓度类胡萝卜素标准样品中类胡萝卜素各组分的保留时间，以各组分不同浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，分别绘制类胡萝卜素各组分的线性回归方程。