[发明专利]一种同时检测含乳制品中多种糖及糖醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛奶、糕点、糖果、奶粉等含乳制品中糖和糖醇的检测方法，特别 涉及一种同时检测上述食品中山梨糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖的高 效液相色谱检测方法。

背景技术

目前糖类检测方法的研究中，主要有高效液相色谱(HPLC)-荧光检测法(FLD)， HPLC-示差折光法(RID)，离子色谱法，高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS)，高效气相 色谱质谱联用法(GC-MS/MS)。HPLC-FLD法虽然灵敏度较高，但是具有较强的选择性；离子 色谱法具有较好的重复性和准确性，但是糖类能在电极表面还原样品中某些分子；HPLC- MS/MS法和GC-MS/MS法虽然具有高分离、高选择、高灵敏的特性，但是其设备昂贵，操作复 杂，通用性较差；现行国标中对单、双糖、糖醇的检测方法主要为化学还原法和HPLC-示差折 光检测法(RID)，但前者费时，操作繁琐，并且只能对具有还原性的糖进行定量检测，无法准 确定性；而HPLC-示差折光检测法(RID)具有操作简便，灵敏度高的优点，是常用的方法。

在国标及日常糖类检测的液相色谱柱方面，目前较常使用的色谱柱是氨基柱，虽 然氨基柱在糖类分析中有较高的灵敏度和分离度，但是氨基柱连通的HPLC-示差折光检测 器(RID)灵敏度高，系统较难平衡。而且氨基容易水解，当样品通过时，水解产物可以与样品 一同进入检测器检测造成干扰。在长时间的使用过程中，流动相通过氨基柱时氨基基团会 有脱落，存在噪声；当样品纯度不高时，噪声也会很大，氨基柱的柱效下降很快。氨基柱的柱 效下降是由氨基本身特性决定的，使用后的常规保养是起不到太大作用的，所以导致氨基 柱的使用寿命较短。

同时，目前用于糖类检测的HPLC常采用反相系统，在流动相的选择上，多选择乙腈 和水为流动相，通过乙腈与水不同比例的混合达到分离特定糖类的目的。但是在氨基柱-乙 腈水系统的分析中，随着检测糖类数量的增加，氨基柱的柱效下降，部分糖类不能有效的分 离。为了增大分离度，就需要不断调整乙腈水的比例，但是当有机相乙腈比例增大到一定程 度后，氨基柱有效键合就会被破坏，从而降低柱寿命。

鉴于不同国家对糖及糖醇的不同要求和食品标签强制性标准的施行，以及进一步 监督食品生产，预防不法商贩利用糖类添加剂的美味、廉价等优点，达到某种营养指标，对 食品进行非法添加，所以需要对常用糖及糖醇进行检测。为了缩短检测周期，提高工作效 率，需要建立一种食品中多种糖及糖醇的同时检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种高速、准确、有效的同时检测含乳制品中多种糖及糖醇 的高效液相色谱分析方法，以大大减轻逐个检测的工作量，提高检测效率，保证产品的质 量。

本发明选择WatersXbridgeAmide柱作为HPLC色谱柱，Amide柱是酰胺键合柱， 相对于氨基键合柱的稳定性更高，柱流失减少，与示差折光检测器（RID）结合噪音较小，系 统易平衡，且Amide柱pH耐受性极佳，耐高温，随着柱温的升高，糖及糖类分析分离度明显 增强，在70℃以上单糖分析效果最强，最高耐受温度为90℃，柱效下降慢，且柱子使用寿命 更长。

本发明选择丙酮、水和三乙胺为流动相，系统为正相系统，结合WatersXbridge Amide柱，耐酸碱性极佳，耐高温，机器噪音小，系统易平衡，且对糖及糖类分离度高，灵敏 度高，分析效果好，随着检测样品数量的增加，柱效下降慢；当大量检测后为了防止柱效下 降，主要流动相丙酮、水比例不需改变，仅仅调整三乙胺的加入量即可保持柱效，且三乙胺 加入量很小，对色谱柱填充物不会造成影响，色谱柱寿命长。

本发明采用的具体技术方案如下：

一种同时检测含乳制品中多种糖及糖醇的方法，所述方法为HPLC-示差折光检测法，其 特征在于所述HPLC的色谱条件为：色谱柱采用酰胺键合柱，流动相为丙酮、水和三乙胺的单 流动相，等度洗脱；柱温为70℃，流速为0.8mL/min，进样量为10μL。

上述酰胺键合柱具体型号为WatersXbridgeAmide。

上述流动相的组成为：丙酮：水=77:23（V/V），每1000mL流动相加入0.115-0.345mL 三乙胺；当目标物分离度下降时，在上述范围内适当增加三乙胺的量。

本发明具体的检测步骤如下：