[发明专利]一株枯草芽孢杆菌、防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的制备方法及其使用方法

权利要求书

1.一株枯草芽孢杆菌，其特征在于该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)PB12保 藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路 1号院3号，保藏日期为2015年03月11日，保藏编号为CGMCCNo.10603。

2.防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的制备方法，其特征在于防治马铃薯 疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂是一种拌种剂；具体的制备方法是按下述步骤进行的：

步骤一、挑取如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)PB12单菌落接入 5mlNYD液体试管中，过夜培养后，再以1％的接种量接种于含100mlNYD培养基的三角 瓶中，于35℃，150r/min振荡器中培养24h，获得菌悬液；

步骤二、称取67g成膜剂用加热至80℃的500g蒸馏水边搅拌边溶解，充分溶解后再 加入500g蒸馏水，而后加入步骤一获得的菌悬液使活菌浓度为5亿//mL；即得到拌种剂。

3.根据权利要求1所述的防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的制备方法， 其特征在于所述成膜剂是聚乙烯醇、黄原胶与水配制的溶液；聚乙烯醇的质量百分比含量 是8％～12％，黄原胶的质量百分比含量是0.1％～0.3％。

4.防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的制备方法，其特征在于防治马铃薯 疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂为防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂颗粒 剂；具体的制备方法是按下述步骤进行的：

步骤(1)、挑取如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)PB12单菌落接 入5mlNYD液体试管中，过夜培养后，再以1％的接种量接种于含100mlNYD培养基的三 角瓶中，于35℃，150r/min振荡器中培养24h，获得菌悬液；

步骤(2)、然后喷加步骤(1)获得的菌悬液至复合基质中，经圆盘造粒获得防治马铃 薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂颗粒剂，颗粒剂的活菌数≧3～5亿//克，复合基质中含 有腐植酸。

5.根据权利要求4所述的防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的制备方法， 其特征在于步骤(2)所述的复合基质按重量百分比是由90％褐煤、5％腐植酸和5％焦糖色 素制成的。

6.根据权利要求5所述的防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的制备方法， 其特征在于褐煤的粒径1.5～4.75mm。

7.防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的使用方法，其特征在于防治马铃薯 疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的使用方法是由下述步骤完成的：种薯切块播种，播种 时将权利要求4方法制备的防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂颗粒剂按4公斤/ 亩用量与化肥一同施入土壤中。

8.防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的使用方法，其特征在于防治马铃薯 疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的使用方法是由下述步骤完成的：

将种薯切块用权利要求2或3方法制备的拌种剂拌种，拌种剂与种薯的质量比是1:50， 阴干后播种，播种时将权利要求4方法制备的防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌 剂颗粒剂按4公斤/亩用量与化肥一同施入土壤中。

9.防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的使用方法，其特征在于防治马铃薯 疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌剂的使用方法是由下述步骤完成的：

将种薯切块用权利要求2或3方法制备的拌种剂拌种，拌种剂与种薯的质量比是1:50， 阴干后播种，播种时将权利要求4方法制备的防治马铃薯疮痂病的枯草芽孢杆菌微生物菌 剂颗粒剂按4公斤/亩用量与化肥一同施入土壤中，待出苗后15天用PB12菌液灌根，7d 后再次灌根，每株灌100ml/次；

其中，所述PB12菌液制备方法如下：挑取如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PB12单菌落接入5mlNYD液体试管中，过夜培养后，再以1％的接种量接种于含 100mlNYD培养基的三角瓶中，于35℃，150r/min振荡器中培养24h，稀释至4×10⁷cfu/ml， 获得PB12菌液菌悬液。