[发明专利]一种拓朴异构酶Ⅱ杂化纳米花的制备方法及应用

权利要求书

1.一种拓朴异构酶Ⅱ杂化纳米花的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：

（1）用超纯水溶解CuSO₄，配成浓度为115～125mmoL/L的CuSO₄溶液；

（2）配置PBS缓冲液使其pH值为7.4，将20mL的上述CuSO4溶液加到3L的拓朴异构酶Ⅱ-PBS缓冲液，在24～26℃下反应3天，将反应产物用超纯水反复超声5～8次，冲洗4～6次，冷冻干燥得固体粉末，即得拓朴异构酶Ⅱ杂化纳米花。

2.一种如权利要求1所述的拓朴异构酶Ⅱ杂化纳米花的应用，其特征在于，该拓朴异构酶Ⅱ杂化纳米花用于分离多穗金粟兰中拓朴异构酶抑制作用的抗肿瘤有效成分的提取，其具体提取步骤如下：

（1）多穗金粟兰粗提液的制备

取多穗金粟兰粗粉18～22g，置于500mL圆底烧瓶，加240～260mL体积分数为95%的乙醇，加热回流提取55～65min，重复提取2～3次，滤过，浓缩，回收乙醇得到浸膏，少量水稀释后，用等体积的石油醚、氯仿依次萃取，用旋转蒸发仪减压回收有机溶剂，得到氯仿部位提取液，备用；

（2）固相萃取柱分离多穗金粟兰氯仿提液中的拓朴异构酶抑制有效成分

将上述得到的拓朴异构酶Ⅱ杂化纳米花采用干法装柱填充到固相萃取柱中，并用色谱纯甲醇平衡柱子；取多穗金粟兰氯仿提取液上样，用体积分数为20%的甲醇溶液淋洗，再用甲醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，即得多穗金粟兰氯仿提取液中拓朴异构酶抑制作用的抗肿瘤有效成分，结合LC/MS分析确定有效成分的结构；

（3）微型固相吸头萃取小柱分离多穗金粟兰粗提液中的拓朴异构酶抑制有效成分

将上述得到的拓朴异构酶Ⅱ杂化纳米花填充到Tip吸头柱并固定，配合单道移液器，作为吸头小柱微萃取装置；先用色谱纯甲醇活化萃取材料，再用体积分数为20%甲醇溶液平衡吸头材料；吸入多穗金粟兰粗提液上样，用体积分数为20%的甲醇溶液淋洗，再用甲醇洗脱，洗脱液氮气吹干，即得多穗金粟兰氯仿提取液中拓朴异构酶抑制作用的抗肿瘤有效成分，结合LC/MS分析确定有效成分的结构。