[发明专利]一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法

说明书

本发明涉及一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法，该方法包括以下步骤：⑴将西兰花毛状根接种于液体培养基，经增殖培养后冷冻干燥并研磨成粉末，得到冻干的毛状根粉末；⑵将新收获的芥籽粉碎后经超声波振荡提取、抽滤除杂，得到粗酶液；⑶冻干的毛状根粉末中加入粗酶液，经酶解、超声波振荡提取后真空抽滤除杂，得到萝卜硫素粗提液；⑷将萝卜硫素粗提液浓缩后萃取，得到乙酸乙酯相A；⑸将液体培养基萃取，得到乙酸乙酯相B；⑹合并乙酸乙酯相A与乙酸乙酯相B后经真空浓缩、溶解，得到萝卜硫素甲醇溶液；⑺萝卜硫素甲醇溶液真空浓缩，即得萝卜硫素粗提物；⑻萝卜硫素膏状粗提物干燥，即得纯度为5~30%的萝卜硫素粗品。本发明简单，高效。

技术领域

本发明涉及一种萝卜硫素的获取方法，尤其涉及一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法。

背景技术

西兰花中含有丰富的抗癌物质萝卜硫素，被美国《时代周刊》评为十大最佳营养蔬菜之一。西兰花可以增强机体免疫力、促进生长、增强血管韧性等功效，可以预防患乳腺癌、胃癌等癌症的风险。西兰花种子与幼苗中的萝卜硫素含量低，但毛状根培养体系中萝卜硫素的产量高。

目前，萝卜硫素制备方法主要有化学合成法和酶法。化学合成法工艺复杂，中间产物难以控制；酶法是目前常用的萝卜硫素制备方法。但西兰花毛状根培养体系中萝卜硫素的提取鲜有报道，对萝卜硫素的提取大多数都集中在西兰花幼苗、花蕾、种子中，且未有西兰花毛状根中萝卜硫素外分泌的研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、高效的从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法。

为解决上述问题，本发明所述的一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法，包括以下步骤：

⑴将西兰花毛状根按接种量为鲜重0.1g接种于300mL的液体培养基进行培养，15d后得到增殖培养的西兰花毛状根；然后于超净工作台上，用灭菌后的镊子取出所述液体培养基中所述培养后的西兰花毛状根，置于滤纸上，吸附根表面水分，经冷冻干燥至恒重后研磨成粉末，得到冻干的毛状根粉末；同时，所述液体培养基封口置于4℃条件下保存；

⑵将新收获的芥籽粉碎至55~65目，得到芥籽粉；该芥籽粉用蒸馏水经超声波振荡提取后真空抽滤除杂，得到粗酶液；

⑶将所述冻干的毛状根粉末按照1g：10mL~1g：30mL加入粗酶液，搅拌均匀，于35℃下静置酶解0.5~1.5h，然后用体积浓度为70~95%的乙醇经超声波振荡提取后真空抽滤除杂，得到萝卜硫素粗提液；

⑷将所述萝卜硫素粗提液先于45~55℃真空浓缩，再于65℃浓缩，得到膏状物A；所述膏状物A用其质量3~5倍的乙酸乙酯溶解后经蒸馏水萃取2~3次，得到乙酸乙酯相A；

⑸将所述步骤⑴中的液体培养基与乙酸乙酯按1：1~3的体积比萃取2~3次，得到乙酸乙酯相B；

⑹将所述乙酸乙酯相A与所述乙酸乙酯相B合并后，在50~60℃下真空浓缩，得到膏状物B，该膏状物用其质量5~10倍的甲醇溶解，得到萝卜硫素甲醇溶液，该萝卜硫素甲醇溶液于-10℃下避光保存备用；

⑺将所述萝卜硫素甲醇溶液于40~50℃真空浓缩至膏状，即得萝卜硫素粗提物；

⑻所述萝卜硫素膏状粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为5~30%的萝卜硫素粗品。

所述液体培养基均指MS基本培养基。

所述步骤⑴与所述步骤⑻中冷冻干燥的条件均是指先对材料进行预冷冻，待温度达到-35~-45℃时抽真空，待压力达到25~35Pa开始加热；从-35至0℃，每5℃为一个阶段，每阶段控温加热0.5~1.5h，最后在5℃控温加热1~3h即可。