[发明专利]一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法

权利要求书

1.一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法，包括以下步骤：

⑴将西兰花毛状根按接种量为鲜重0.1g接种于300mL的液体培养基进行培养，15d后得到增殖培养的西兰花毛状根；然后于超净工作台上，用灭菌后的镊子取出所述液体培养基中所述培养后的西兰花毛状根，置于滤纸上，吸附根表面水分，经冷冻干燥至恒重后研磨成粉末，得到冻干的毛状根粉末；同时，所述液体培养基封口置于4℃条件下保存；所述冷冻干燥的条件均是指先对材料进行预冷冻，待温度达到-35~-45℃时抽真空，待压力达到25~35Pa开始加热；从-35至0℃，每5℃为一个阶段，每阶段控温加热0.5~1.5h，最后在5℃控温加热1~3h即可；

⑵将新收获的芥籽粉碎至55~65目，得到芥籽粉；该芥籽粉用蒸馏水经超声波振荡提取后真空抽滤除杂，得到粗酶液；

⑶将所述冻干的毛状根粉末按照1g：10mL~1g：30mL加入粗酶液，搅拌均匀，于35℃下静置酶解0.5~1.5h，然后用体积浓度为70~95%的乙醇经超声波振荡提取后真空抽滤除杂，得到萝卜硫素粗提液；

⑷将所述萝卜硫素粗提液先于45~55℃真空浓缩，再于65℃浓缩，得到膏状物A；所述膏状物A用其质量3~5倍的乙酸乙酯溶解后经蒸馏水萃取2~3次，得到乙酸乙酯相A；

⑸将所述步骤⑴中的液体培养基与乙酸乙酯按1：1~3的体积比萃取2~3次，得到乙酸乙酯相B；

⑹将所述乙酸乙酯相A与所述乙酸乙酯相B合并后，在50~60℃下真空浓缩，得到膏状物B，该膏状物用其质量5~10倍的甲醇溶解，得到萝卜硫素甲醇溶液，该萝卜硫素甲醇溶液于-10℃下避光保存备用；

⑺将所述萝卜硫素甲醇溶液于40~50℃真空浓缩至膏状，即得萝卜硫素粗提物；

⑻所述萝卜硫素膏状粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为5~30%的萝卜硫素粗品；所述冷冻干燥的条件均是指先对材料进行预冷冻，待温度达到-35~-45℃时抽真空，待压力达到25~35Pa开始加热；从-35至0℃，每5℃为一个阶段，每阶段控温加热0.5~1.5h，最后在5℃控温加热1~3h即可。

2.如权利要求1所述的一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述液体培养基均指MS基本培养基。

3.如权利要求1所述的一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤⑵中超声波振荡提取的条件是指料液比为1g：55~65mL，温度为30~40℃，超声波功率为700~900W，提取时间为8~12min。

4.如权利要求1所述的一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤⑶中超声波振荡提取的条件是指冻干的毛状根粉末与乙醇的料液比为1g：15~30mL，温度为30~40℃，超声波功率为700~900W，提取时间为15~45min。

5.如权利要求1所述的一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤⑷和所述步骤⑹及所述步骤⑺中真空浓缩的条件均是指真空度为-0.06~-0.08MPa。

6.如权利要求1所述的一种从西兰花毛状根培养体系中获取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤⑷中乙酸乙酯与蒸馏水的体积比为1：1~3。