[发明专利]检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及肺炎支原体感染患者病原体检测的技术领域，尤其涉及一种检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae，MP）是全球各年龄段人类呼吸道感染的常见病原体。它是支原体中唯一可导致呼吸道感染的病原体，引起上呼吸道感染、气管炎、支气管炎、细支气管炎、社区获得性肺炎，并可加重支气管哮喘。MP还可引起诸多肺外表现及全身性疾患，例如脑炎、格林巴利综合征、心包炎、关节炎、自身免疫性贫血、肾功能损害、哮喘和Crohn's病等。快速准确的判断患者是否感染了肺炎支原体，对进一步判断患者的病情和对症治疗具有极其重要的意义。

目前临床上肺炎支原体的检查常用方法为分离培养法、PCR检测法、ELISA检测法、免疫层析法等。这些检测方法灵敏度高，检测结果可靠，常作为临床确诊辅助手段，但设备昂贵，样品前处理过程复杂，对操作人员要求高，耗时较长，不适合批量样品的快速检测。胶体金免疫层析技术是一种新型的免疫标记技术，是在免疫层析的基础上建立起来的，以胶体金为示踪物与抗原、抗体特异性反应相结合的一种检测技术。目前广泛应用ELISA检测法和免疫层析法全部是检测IgG或IgM，由于人体产生抗体需要一定条件和时间，均具有一定的滞后性和不准确性，无法实现快速、准确检测的目的。检测结果不能满足临床诊断的需要。该检测方法结果判读简单，不需要专业的操作人员，检测时间短，携带方便，特别适合大批量、快速、床旁检查诊断。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于提供一种特异性强、操作简便，检测快速、准确并适合床旁使用的专门用于检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，以便对肺炎支原体感染患者病原体进行高灵敏度、快速、早期的检测。

技术方案：

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条，该试纸条包括依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫，其特征在于：所述结合垫包被设有肺炎支原体抗体MPh2-胶体金-碳纳米管标记物；所述硝酸纤维素包被膜上设有检测线和质控线；所述检测线包被有肺炎支原体抗体MPh1，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。

检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

1）胶体金的制备：于250mL烧杯中加入99mL纯水，于恒温磁力搅拌器上使用温度档200℃对其进行加热，转速为200r/min；加热至沸腾状态后，沸腾时的实际温度为100℃，向烧杯中快速加入1mL1％柠檬酸三钠溶液；1分钟后快速加入1%氯金酸溶液1mL，烧杯中的溶液变为红色后再加热10min，直至溶液透亮，冷却至室温，100ml容量瓶定容，即制得胶体金，于4℃密封保存；

2）肺炎支原体抗体MPh2-胶体金-碳纳米管标记物的制备及纯化：

取调节pH值至8.5的所述胶体金1mL于10.0mL烧杯中，向烧杯中加入10μg的肺炎支原体抗体MP-h2，盖上薄膜密封，用磁力搅拌器混匀20min后静置10min；

向所述烧杯中加入100μL5％BSA溶液，用磁力搅拌器混匀20min，静置10min，制得金标抗体；

继续加入5μL10％碳纳米管，继续混匀10min，即肺炎支原体抗体MPh2-胶体金-碳纳米管复合标记物；

将制得的复合标记物溶液于4℃2500r/min，离心10min，去除下层沉淀，将上清液转到另一离心管中，于4℃9500r/min，离心30min，去除上清液，将沉淀用胶体金稀释溶液稀释至原浓度的1/20，于4℃保存备用；

3）试纸条的组装：

(1)将硝酸纤维素包被膜和吸水垫分别贴于PVC底板上，吸水垫压住硝酸纤维素包被膜上方1-2mm；

(2)将粘贴好硝酸纤维素包被膜和吸水垫的PVC底板在切条机上切割成4mm宽的试纸条；

(3)将样品垫和结合垫切成4mm宽的条，同时将结合垫浸泡在肺炎支原体抗体MPh2-胶体金-碳纳米管标记物溶液中，并于37℃烘干，制得金标垫；

(4)烘干后的金标垫剪成1cm长的小块并贴于PVC底板上，金标垫压住硝酸纤维素包被膜下方1-2mm，同时用样品垫压住金标垫下方1-2mm，根据试纸条长度修剪样品垫；