[发明专利]检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条，该试纸条包括依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫，其特征在于：所述结合垫包被设有肺炎支原体抗体MPh2-胶体金-碳纳米管标记物；所述硝酸纤维素包被膜上设有检测线和质控线；所述检测线包被有肺炎支原体抗体MPh1，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。

2.一种如权利要求1所述的检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

1）胶体金的制备：于250mL烧杯中加入99mL纯水，于恒温磁力搅拌器上使用温度档200℃对其进行加热，转速为200r/min；加热至沸腾状态后，沸腾时的实际温度为100℃，向烧杯中快速加入1mL1％柠檬酸三钠溶液；1分钟后快速加入1%氯金酸溶液1mL，烧杯中的溶液变为红色后再加热10min，直至溶液透亮，冷却至室温，100ml容量瓶定容，即制得胶体金，于4℃密封保存；

2）肺炎支原体抗体MPh2-胶体金-碳纳米管标记物的制备及纯化：

取调节pH值至8.5的所述胶体金1mL于10.0mL烧杯中，向烧杯中加入10μg的肺炎支原体抗体MP-h2，盖上薄膜密封，用磁力搅拌器混匀20min后静置10min；

向所述烧杯中加入100μL5％BSA溶液，用磁力搅拌器混匀20min，静置10min，制得金标抗体；

继续加入5μL10％碳纳米管，继续混匀10min，即肺炎支原体抗体MPh2-胶体金-碳纳米管复合标记物；

将制得的复合标记物溶液于4℃2500r/min，离心10min，去除下层沉淀，将上清液转到另一离心管中，于4℃9500r/min，离心30min，去除上清液，将沉淀用胶体金稀释溶液,稀释至原浓度的1/20，于4℃保存备用；

3）试纸条的组装：

(1)将硝酸纤维素包被膜和吸水垫分别贴于PVC底板上，吸水垫压住硝酸纤维素包被膜上方1-2mm；

(2)将粘贴好硝酸纤维素包被膜和吸水垫的PVC底板在切条机上切割成4mm宽的试纸条；

(3)将样品垫和结合垫切成4mm宽的条，同时将结合垫浸泡在肺炎支原体抗体MPh2-胶体金-碳纳米管标记物溶液中，并于37℃烘干，制得金标垫；

(4)烘干后的金标垫剪成1cm长的小块并贴于PVC底板上，金标垫压住硝酸纤维素包被膜下方1-2mm，同时用样品垫压住金标垫下方1-2mm，根据试纸条长度修剪样品垫；

(5)在结合垫和吸收垫之间的硝酸纤维素包被膜上依次包被肺炎支原体抗体MP-h1抗体和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和控制线，采用金标划膜仪进行包被划线，具体参数为平台移动速度40mm/s，单位喷量：检测线为0.8μL/cm，质控线为1.0μL/cm，使得肺炎支原体抗体MP-h1包被浓度为1.0mg/mL；羊抗鼠IgG包被浓度为1.0mg/mL。

3.根据权利要求2所述的检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述胶体金的检验标准为通过紫外分光光度计测量最大吸收波长为525nm。

4.根据权利要求2所述的检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：在所述试纸条的组装步骤中的（3）中，还包括对样品垫和金标垫进行前处理的步骤，即将样品垫与结合垫用切条机分别切成4mm宽的长条，用含有5％的蔗糖、5％BSA和终体积浓度为0.1％的pH为8.5的0.01mol/L的PBS溶液进行浸泡，浸泡后将溶液沥干，在37℃条件下烘干12h备用。

5.根据权利要求2所述的检测肺炎支原体的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：该制备方法还包括对容器的清洗，具体为：首先将试验所用容器在重铬酸钾洗液中浸泡24h，取出后用自来水进行若干次清洗，再用超纯水清洗3次；将清洗干净的容器于二氯甲硅烷含量为5％的氯仿中浸泡1min后进行硅化处理；将经过硅化处理过的容器放置于室温条件下干燥，待干燥完成后用超纯水清洗干净并于烘箱中37℃进行干燥处理，备用。