[发明专利]肌动蛋白基因片段的应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及肌动蛋白基因片段的应用。

背景技术

菠萝蜜(ArtocarpusheterophyllusLam.)，英文名Jackfruit，又名木菠萝、树菠萝，为桑科木菠萝属常绿乔木，是典型热带水果，素有“热带珍果”之称。菠萝蜜果实中含有丰富的糖分、蛋白质、维生素、类胡萝卜素等营养物质。探讨其果肉营养物质形成的生物学问题，可以为解析菠萝蜜主要品质性状形成的机理提供参考，是菠萝蜜分子育种研究的重要基础。

菠萝蜜果实发育一般可分为3个典型时期：1.果肉形成期(开花后1-2个月)，2.膨大期(开花后2-3个月)，3.成熟期(开花后3-4个月)。不同发育时期参与调控果实发育的基因各不相同，为了更好的理解基因水平上菠萝蜜果实品质形成机理，研究营养物质合成相关功能基因的表达模式具有重要作用。目前，分子生物学领域研究基因表达的主要实验技术以实时荧光定量PCR、Northern杂交、RT-PCR、Western杂交为主，这些技术都需要应用合适的内参基因对目标基因表达量进行校正，才能获得真实可靠的结果。

内参基因(internalcontrolgene)指是在各种实验环境和影响因子下、在不同的组织和细胞中都能恒定或相对稳定地表达的基因。应用看家基因(Housekeepinggenes)作为内参基因对目标基因表达量进行校正是最为通用、可靠的方法。主要应用的看家基因有组蛋白3(Histone3)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)、多聚泛素基因(polyubiquitin)、肌动蛋白(Actin)和微管蛋白(tubulin)等。菠萝蜜作为一种非模式作物，目前尚缺乏可用的基因组信息。因此，内参基因的应用只能以其他作物同源基因的保守区域序列作为参考、设计引物进行后续研究，由于基因的保守区域在基因家族其他成员中同样存在，因此在实验中往往会造成非特异结果，不能满足实验需求(参考文献：菠萝蜜实时荧光定量PCR分析中内参基因的筛选.热带作物学报2014，35(7)：1374-1381)。因此，发掘菠萝蜜自身的内参基因，有利于提高基因表达模式研究的稳定性、可靠性和重复性，是目前菠萝蜜分子生物学研究急需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种肌动蛋白(Actin)基因片段在定量检测菠萝蜜基因中作为内参基因的应用，所述Actin基因片段在菠萝蜜根、茎、叶、授粉后30天果实、授粉后50天果肉、授粉后70天果肉、授粉后90天果肉、授粉后110天果肉、授粉后120天果肉共9个组织间稳定、特异表达。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

SEQIDNo.1所示核苷酸序列的肌动蛋白基因片段在定量检测菠萝蜜基因中作为内参基因的应用。

本发明针对菠萝蜜目前尚缺乏可用的基因组信息的现状，提供了特定的一段Actin基因片段，通过RT-PCR和实时荧光定量PCR技术检测，结果表明选定的Actin基因片段能够在9个菠萝蜜组织间稳定、特异表达，可用于今后研究菠萝蜜功能基因在不同组织间表达分析的内参基因，是菠萝蜜功能基因组学研究的重要基础。

其中，所述定量检测优选为实时荧光定量PCR检测。

所述菠萝蜜基因在本发明的具体实施方式中为菠萝蜜根、茎、叶、授粉后30天果实、授粉后50天果肉、授粉后70天果肉、授粉后90天果肉、授粉后110天果肉和/或授粉后120天果肉中的基因。

在进行类似实时荧光定量PCR定量检测时，所述肌动蛋白基因片段使用SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示核苷酸序列检测基因表达。

在对所述肌动蛋白基因片段的RT-PCR和实时荧光定量PCR的检测试验中，所述肌动蛋白基因片段在本发明提及的9个不同的菠萝蜜组织中表达相对一致，通过熔解曲线证明了所述肌动蛋白基因片段具有较高的特异性，进一步与其他常用内参基因进行表达稳定性比较分析，结果表明所述肌动蛋白基因片段的稳定性最好。

由以上技术方案可知，本发明以SEQIDNo.1所示核苷酸序列的肌动蛋白基因片段作为内参基因，其在菠萝蜜不同组织间可稳定地、特异地表达，由此可通过定量检测技术更好的理解基因水平上菠萝蜜果实品质形成机理，研究营养物质合成相关功能基因的表达模式，同时弥补了目前菠萝蜜一直缺少自身可用的内参基因的缺陷。

附图说明