[发明专利]一种从微量辣椒疫霉菌游动孢子中提取RNA的方法在审
| 申请号： | 201610047920.8 | 申请日： | 2016-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN105754989A | 公开（公告）日： | 2016-07-13 |
| 发明（设计）人： | 朱书生;丁旭坡;杨敏;钏有聪;罗丽芬;江冰冰;刘屹湘;黄惠川;何霞红;朱有勇 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司 53115 | 代理人： | 杨宏珍 |
| 地址： | 650201 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 微量 辣椒 霉菌 游动 孢子 提取 rna 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种从微量辣椒疫霉菌游动孢子中提取RNA的方法，其特征该方法的具体步骤如下：
a.均匀加3mL预冷且含RNase抑制剂、1μL/mL的DEPC水于产孢的辣椒疫霉培养皿中，置于4℃冰箱放置10min，使游动游动孢子释放于水中，形成游动孢子悬浮液；将含5000个游动孢子的悬浮液转入15mL离心管中，于4℃，18000g离心5min，弃上清；
b.加入1mLTrizol、1μLβ-巯基乙醇、1μLRNase抑制剂，剧烈斡旋1min，转入1mLEP管中，于20℃超声波处理5min；
c.离心：加入200μL氯仿，剧烈斡旋1min，置于室温15min，于4℃，12000g离心15min；
d.将上层水相转入新的1.5mLEP管中，加入500μL异丙醇，于手中上下翻转5-10次，再加入2μL的糖原，1μLRNase抑制剂，置于-20℃，过夜放置12h；
e.于4℃，12000g直接离心15min；管底形成沉淀；
f.弃上清，加入1mL75％乙醇，剧烈斡旋30s，2次；
g.于室温晾干10分钟；
h.加入10μLDEPC水溶解。
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