[发明专利]定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法

权利要求书

1.一种定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)荧光微塑料颗粒的制备：首先配制10-20mL的三氯甲烷与异丙醇1：1体积比的混合溶剂，然后称取0.1-0.2g交联聚苯乙烯微球和5-10mg的4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑加入上述混合溶剂中，并在超声和氮气保护条件下分散溶解，充分溶解后的混合液体进行干燥，然后用50-70%乙醇洗涤以去除多余荧光染料，接着离心回收荧光微塑料，制备出带绿色荧光的PS微球；

(2)哺乳动物暴露实验：选择上述合成的荧光标记微塑料作为受试样品，选取模式哺乳动物进行灌胃染毒实验，以健康哺乳动物作为空白对照组；

(3)样品采集：荧光微塑料染毒周期结束以后，受试动物解剖，采集组织样品；

(4)冷冻干燥组织样品：使用冷冻干燥仪，分别冷冻干燥空白对照组和染毒组的组织样品至恒重；

(5)湿法消解样品：称取一定量的冻干组织样品，采用湿法消解组织样品；

(6)荧光定量检测微塑料含量：采用空白对照组动物的组织消解液，加入已知含量的荧光微塑料，制备不同浓度梯度的悬浊液，在设定的最大激发波长和最大发射波长下，用荧光光谱仪检测其荧光值，以荧光强度和对应的微塑料浓度绘制出标准曲线，然后检测染毒组组织消解液的荧光值，根据标准曲线确定组织液微塑料浓度，并换算出各组织中微塑料含量。

2.如权利要求1所述的定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法，其特征在于，在步骤（1）中，超声分散条件为在100W超声下处理15-20分钟，干燥条件为真空干燥箱中在0.15Mpa、32℃-35℃下干燥12-16小时，以50-70%乙醇洗涤并随后在6000rpm/min下离心10-20分钟，洗涤和离心重复3-5次，以回收制备出的绿色荧光PS微球。

3.如权利要求1所述的定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法，其特征在于，在步骤(2)中，模式哺乳动物为大鼠或小鼠，染毒实验的染毒周期为一周。

4.如权利要求1所述的定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所采集的组织样品为肝脏、肾脏、小肠或其组合。

5.如权利要求1所述的定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法，其特征在于，在步骤（4）中，冻干条件为在-10大气压和-50℃条件下冷冻干燥组织样品至恒重。

6.如权利要求1所述的定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法，其特征在于，在步骤(5)中，称取一定量的冻干组织样品，采用湿法消解组织样品，具体消解条件为每0.1克组织样品中加入1毫升的65%V/V硝酸，70℃水浴2小时，然后加入与硝酸等体积的30%V/V双氧水，85℃水浴2小时，消解结束后，消解液呈现淡黄透明，定容到10毫升。

7.如权利要求1所述的定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法，其特征在于，在步骤(6)中，设定的最大激发波长为445nm，最大发射波长为550nm。