[发明专利]一种检测APOE基因多态性的引物及其方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测APOE基因多态性的引物及其方 法。

背景技术

载脂蛋白E(apolipoproteinE,ApoE)是血浆中重要的载脂蛋白之一，其基因定位 于第19对染色体长臂上，长37kb，其包含4个外显子和3个内含子。ApoE有三种构体 （isoform）即E2、E3和E4。ApoE的氨基酸序列的112位和158位两种氨基酸残基即精氨酸 （Arg）和半胱氨酸（Cys）的交换决定了异构体的种类。ApoE4在这两个位置上都是Arg；E2都 是Cys；112位为Cys和158位是Arg者为ApoE3异构体，在自然人群中，基因频率E3分布最高， ApoE3/3表型分布约70%。人群中可有六种不同的表型：三种纯合子（E2/2，E3/3，E4/4）和三 种杂合子（E2/3，E2/4，E3/4）。

ApoE主要在肝脏合成、分泌和代谢，参与脂质的运输、储存及排泄，有修复组织、抑 制血小板聚集、免疫调节等作用。李冬梅等发表了一篇题目为“APOE基因多态性与阿尔茨海 默病的相关性研究”的论文，该论文表明APOEε4等位基因，HDL-C与散发性AD有关联，APOEε4 可能是散发性AD发病的危险因素，并建议把APOEε4和HDL-C等作为散发性AD的生物标记。现 代研究发现，ApoE基因多态性还与冠心病(coronaryheartdisease,CHD)、高脂血症、脑梗 塞、Alzheimer病(AD)和慢性乙型肝炎等疾病有着密切的关系。因此，研究和开发出检测 ApoE基因多态性的方法或试剂盒对临床具有重大的意义。

中国专利申请201110446186.X公开了APOE基因检测试剂盒及扩增方法和检测方 法，所述试剂盒包括检测基因APOErs429358位点和rs7412位点的引物及内参引物，所述检 测APOE基因rs429358位点的引物包括正向野生型引物和正向突变型引物；所述检测APOE 基因rs7412位点的引物包括正向野生型引物和正向突变型引物；所述APOE基因内参引物 包括正向内参引物和反向共用引物。所述APOE基因检测试剂盒是对受检样本DNA分别用野 生型和突变扩增缓冲液进行扩增，在每个反扩增反应中同时对2个目的片段和1个内参片段 进行扩增，扩增后经凝胶电泳在紫外光下见到根据片段大小区分开的产物条带，根据条带 的有无判断2个SNP位点的基因型。

中国专利申请201510288426.6公开了检测ApoE基因多态性的引物、试剂盒及其 PCR方法，所述检测ApoE基因多态性的引物包括检测rs429358位点和rs7412位点的两组引 物。该检测试剂盒能够大大增加等位基因特异性引物PCR区分不同等位基因位点的能力，使 不同位点间的非特异性交叉扩增的可能性降到最低，能够做到真正“全或无”式的扩增，不 仅有很好的特异性，也具有非常好的灵敏度，能检出1ng基因组DNA中的基因型分布情况。

然而，上述的ApoE基因多态性的检测引物较复杂，而且检测步骤较繁琐，不利于该 检测方法的推广和利用。因此，研究和发开出检测方法简单，操作便捷，引物特异性高，检测 结果精确度高的ApoE基因多态性的检测方法仍是目前研究的重点。

发明内容

为了解决现有技术中存在的缺陷，本发明提供一种检测APOE基因多态性的引物及 其方法，该引物主要用于检测APOE基因中APOE_T112Ch和APOE_C158T的两个位点，具有特 异性好、灵敏度高、准确性好等优点，为APOE基因多态性提供了一种简单有效的检测方法。

本发明提供了一种检测APOE基因多态性的引物，包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR扩增引物为：针对APOE的上游引物5’-GCCTACAAATCGGAACTGGA-3’（SEQ IDNO.1）和下游引物5’-ACCTGCTCCTTCACCTCGT-3’（SEQIDNO.2）；所述SNaPshotPCR引 物包括：针对APOE_T112C的SNaPshotPCR引物5’-GCGCGGACATGGAGGACGTG-3’（SEQID NO.3）；针对APOE_C158T的SNaPshotPCR引物5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGATGCCGATGACCTGCAGAAG-3’（SEQIDNO.4）。

进一步地，所述SNaPshotPCR引物中APOE_T112C与APOE_C158的引物浓度比为1: 1。