[发明专利]一种3‑氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法有效
申请号: | 201610043274.8 | 申请日: | 2016-01-23 |
公开(公告)号: | CN105675783B | 公开(公告)日: | 2017-11-17 |
发明(设计)人: | 孙凤霞;孔琳;王美玲;韩珊;张琛;白少玲 | 申请(专利权)人: | 河北科技大学 |
主分类号: | G01N30/88 | 分类号: | G01N30/88 |
代理公司: | 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司13100 | 代理人: | 刘磊娜 |
地址: | 050000 *** | 国省代码: | 河北;13 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 氨基 丁醇 手性 纯度 hplc 分析 方法 | ||
技术领域
本发明属于药物分析技术领域,具体涉及一种3-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法。
背景技术
HPLC检测法具有检测灵敏度高、精确度高,检测所需时间少,检测结果重复性高等优点,是当前分析化学中常用的检测手段。
(R)-3-氨基丁醇是合成度鲁特韦的重要中间体。度鲁特韦是英国制药巨头葛兰素史克(GSK)旗下抗艾滋病(HIV)新药,2013年8月12日美国食品和药物管理局(FDA)。临床前研究结果显示度鲁特韦具有较强的抗HIV-1病毒活性,安全性及耐受性良好。
吴生文等(CN201410488279.2)使用苄氧羰基氯与3-氨基丁醇衍生化生成N-Cbc-3-氨基丁醇,210nm下液相检测。色谱柱AD-H;流动相正己烷:异丙醇(9:1);保留时间S-异构体11.1分钟,R-异构体12.2分钟,过程中使用价格昂贵的正相柱。R. H. BUCK等(Journal of chromatography)用邻苯二甲醛-硫醇类衍生物对3-氨基丁醇进行衍生化,色谱条件:Knauer Hypersil ODS 柱子,流动相0.05%磷酸钠缓冲盐溶液/甲醇(体积比35/65),pH 7.0,荧光检测。而通过与带紫外吸收的手性试剂进行快速双衍生化,得到既有紫外吸收又有三个手性基团的衍生物,能够直接在反相高效液相与紫外联用上进行异构体的分析。
度鲁特韦分子结构中有两个手性中心,由手性源(R)-3-氨基丁醇引入,度鲁特韦两个非对映异构体的相对含量只取决于产生它们过渡态的相对能量高低,由于生成(4R,12aS)过渡态能量较(4R,12aR)异构体低,因此反应最后生成了以(4R,12aS)构型为主的产物。低光学纯的(R)-3-氨基丁醇中的另一个异构体,在反应中会生成四个手性化合物,降低度鲁特韦的手性纯度,因此(R)-3-氨基丁醇的光学纯度直接决定了度鲁特韦的光学纯度、杂质多少和抗艾滋病作用。尽管这种新药上市时间很短,但由于其高效的抗艾滋病作用引发了对这种新药的大量需求,从而导致对度鲁特韦手性源(R)-3-氨基丁醇的大量需求。由于3-氨基丁醇化合物分子结构含一个伯胺和一个羟基,无紫外吸收,建立快捷的、准确可靠的光学纯度分析方法难度非常的大,因此对(R)-3-氨基丁醇进行准确的检测分析,对于合成新药度鲁特韦具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷,提供一种3-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法,可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。
为了实现上述目的,本发明采取的技术方案如下:
一种3-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法,具体包含如下步骤:
步骤一、衍生化
将3-氨基丁醇溶于有机溶剂中,在一定的温度条件下,以(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯为衍生化试剂,控制3-氨基丁醇和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比,进行衍生化反应,得到衍生化化后的3-氨基丁醇,反应式见式I;
式I
步骤二、分离检测
采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的3-氨基丁醇进行定性、定量和对映体过量率测定。
所述的有机溶剂选自甲苯、二甲苯、石油醚、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃、氯仿和四氯化碳中的一种或两种以上的组合。
所述的有机溶剂与3-氨基丁醇的体积比为0.1~300:1,优选为1~20:1。
所述的一定温度是指从-10℃到回流温度,优选为15~35℃。
本发明的回流温度具体数值与有机溶剂的选择有关,本领域技术人员可以根据溶剂的选择清楚的确定回流温度的范围。
所述的3-氨基丁醇和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比为1:2~20。
所述的紫外检测器的检测波长为210~300nm,优选220~260nm。
所述的反相高效液相色谱使用的色谱柱是普通反相柱。优选的,色谱柱为反相C18柱,最优选的为迪马反相C18柱(250×4.6mm,5μm,pH范围2.0~8.0)。
所述的反相高效液相色谱的流动相由缓冲盐溶液和有机溶剂组成,有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种;有机溶剂占流动相的体积比例范围为20%~80%,优选范围为40%~60%。
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