[发明专利]一种耐油污微藻的高通量筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于微藻筛选领域，具体涉及一种高通量筛选耐油污微藻的方法。

背景技术

来源于生活污水、石油泄露、溢油及石油工业化学制品等的油污，是水体富营养化 重要的有机污染源。因此，油污水处理是水质保护和治理的一个重要目标。在消减工业油污 水排放、生活污水治理等领域，将耐油微藻或可利用油污组分的微藻接种到油污水中，一方 面微藻的增殖利用可消减油污，另一方面增殖的微藻生物量可以用于开发进一步的生物质 应用。而筛选合适的微藻是一个重要的环节，其中，微藻对油污的耐受性分析是一个重要方 法。

但是，油污水是一类复杂的多源性污染物，来源于生活污水的、石油开采慢漏的、 突发性溢油的、石油化工的污染排放的、或其他生产劳动过程中排放的油污，其组分在各时 间、各案例中都可能各不相同；同时，油污染浓度的不同，也对微藻增殖造成不同影响。另 外，自然界中的微藻种类繁多，不同种类的微藻，受复杂多样的油污染源影响时，其细胞增 殖、生理生化参数变化特征都是不同的；在不同季节、不同营养盐环境条件、不同的起始生 物量对油污染的响应差异也显著不同。

可见，在筛选耐油污微藻时，需设置油污染和微藻的多维度互作实验组，因此，筛 选和分析时，在方法学上具有显著的复杂性，常出现大量实验组以及产生复杂的数据关系， 工作量大，数据量大且关系复杂，从而易造成结论的不确定性、以及筛查范围、筛查对象局 限性。

发明内容

本发明提供了一种高通量筛选耐油污微藻的方法，可以高效的筛查高通量筛选耐 油污微藻从而弥补现有技术的不足。

本发明的方法，包括如下的步骤：

1)首先，分别将待检测的已经纯化的单种微藻，分别加入到已添加不同浓度的待 检测油水的培养基中进行微藻的增殖培养作为耐油污检测组；并设置2-6个平行样；

2)同时，将对应微藻分别加入无油污的正常微藻培养基中，在相同条件下进行微 藻的增殖培养，作为空白对照组；设置2-6个平行样；

3)对全部微藻在相同的环境条件下进行一次培养方式的增殖培养，对微藻生物量 变化进行每天连续检测，获得各组每天的生物量变化数据；

4)一次培养结束后，利用Simca-P计算机软件对全部数据进行主成分分析(PCA)；

5)结果的判别

根据PCA图分析，与空白对照组明显分开的微藻为受到对应油污染影响严重的种 类，为不耐油污种类；与空白对照组不能分开或分开无显著性的，为耐油污种类。

所述的微藻，指来源于淡水、海水、咸水或其他水域环境中的、已经纯化的可培养 的单细胞自养微藻或具有异养能力的微藻；

所述的油污水，指各种来源的油污染水，包括生活污水、石油工业污水来源的石油 化学品油污水、特殊劳动或生产工艺过程中排放的油污水等；或已经明确化学成分的油污 水；

所述培养基，指常用适宜微藻增殖的培养基，如f/2培养基，或在培养介质中添加 利于特异微藻正常增殖营养需求的培养基；

所述导入Simca-P软件的数据整理，指将观测的生物量数据作为X变量，实验组别 信息作为Y变量，导入Simca-P软件。

本发明的方法，可以在筛选实验中，根据微藻和油污水的特征，设置足够多的实验 组别：构建微藻种类、不同起始密度与油污水不同处理、不同浓度在不同培养条件下的多维 度相互关系实验组，应用Simca-P软件的大数据分析能力，从而可以确定出典型条件下耐受 油污的微藻。

附图说明

图1：4个微藻在4种石油化学品3个浓度下的生物量变化图；

图2：微藻对不同石油化学品响应的PCA图。

具体实施方式