[发明专利]一种肠道病毒嵌合病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种肠道病毒嵌合病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用，属于生物技术领域。本发明的嵌合病毒样颗粒为基于乙型肝炎病毒核心蛋白的重组肠道病毒多表位嵌合抗原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码该病毒样颗粒的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。将SEQ ID NO.2所示DNA片段克隆到大肠杆菌表达载体中构建重组表达质粒；将重组表达质粒转化大肠杆菌，获得工程菌；培养工程菌，经诱导表达和蛋白纯化等操作得到肠道病毒嵌合病毒样颗粒。本发明的病毒样颗粒能诱导机体产生特异性体液和细胞免疫应答，可用于人和易感动物肠道病毒EV71和CA16感染的免疫预防，用于制备肠道病毒疫苗。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种肠道病毒嵌合病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒感染引起的一种病毒性传染病，主要感染婴幼儿。表现为发热，手、足、口腔等部位出现皮疹和溃疡等临床特征。少数患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等重症并发症，导致死亡(Lee etal.,2009；Liu et al.,2014)。手足口病的主要病原体为肠道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)和柯萨奇A16型(Coxsackie A16，CA16)。EV71感染常引发严重的中枢神经系统疾病及并发症，CA16主要引起心肌炎和心包炎等疾病(Lee et al.,2009)。近年来，我国HFMD的暴发流行呈增加态势，重症病例增多，并发症的发生率与病死率增高。目前有效治疗HFMD的药物缺乏，疫苗免疫接种成为预防HFMD暴发流行、减少重症病例和降低死亡率的最有效手段之一。因此，研发安全有效、能够预防EV71和CA16感染的疫苗用于易感人群免疫接种，是防控HFMD爆发流行、保障儿童健康和生命安全的关键(Cai et al.,2014)。

EV71和CA16均属于小RNA病毒科、肠道病毒属成员，两者具有类似的结构和生物学特性。病毒基因组为单股正链RNA，由7400多个核苷酸组成(Xu et al.,2010)，基因组包含一个大的开放阅读框(ORF)，编码由2194个氨基酸的多聚蛋白。该多聚蛋白经水解产生P1、P2、P3三个前体蛋白，其中P1进一步加工成VP1、VP2、VP3和VP4等四个衣壳蛋白。在病毒粒子中，VP4包埋在病毒粒子外壳的内侧，与病毒核心紧密连接，VP1、VP2和VP3嵌在病毒颗粒表面。VP1、VP2和VP3蛋白中的一些保守氨基酸构成的表位能够诱导与多种亚型EV71发生反应的中和抗体，产生交叉保护免疫；或通过诱导EV71特异性CD4⁺T细胞应答增强体液免疫应答(Foo et al.,2007b；Wei et al.,2012)；同样，由CA16 VP1的保守氨基酸表位能够诱导中和抗体，保护机体抵抗CA16感染(Shi et al.,2013)。这些VP蛋白中的保守氨基酸抗原表位是研制手足口病亚单位疫苗预防EV71和CA16感染的重要靶标。