[发明专利]一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液 及其制备方法和应用。

背景技术

细菌性结膜炎是一种由细菌感染引起的临床常见的眼科疾病之一，俗称“红眼”或“火 眼”。其临床常见症状为结膜充血、结膜囊脓性、粘液性或黏脓性分泌物，也是定性和病变 程度的诊断依据。常见的致病细菌有科一韦杆菌、肺炎双球菌、流行性感冒杆菌、金黄色葡 萄球菌等，一般多在春夏暖和季节流行，但由肺炎双球菌引起者多见于冬季。

该病具有一定的自限性，病程通常在两周之内。虽然该病的诊断和治疗不难，但是，若 治疗不及时或方法不当，容易转为慢性结膜炎，对患者的损伤较大。临床上通常使用抗生素 滴眼液进行治疗，虽然可以收到显著的效果，但复发率相对较高，而且临床上有普遍滥用抗 生素的问题，从而导致耐药菌株不断增多，故开发一种敏感有效的药物来治疗细菌性结膜炎 是当务之急。

DC细胞是一种重要的淋巴细胞，在机体抗病毒自然免疫中发挥着重要作用，故将DC 细胞应用于细菌性结膜炎的治疗无疑具有重大意义。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，提供一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液， 含有DC细胞分泌的蛋白浓缩物，不仅预防及治疗细菌性结膜炎的效果显著、不易复发，能 够大大减轻患者的痛苦，而且能够替代现有技术中普遍使用的抗生素滴眼液，减少了普遍滥 用抗生素的问题。

本发明的另一目的是提供一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液的制备方法。

本发明的再一目的是提供一种DC细胞蛋白滴眼液用于治疗细菌性结膜炎的用途。

本发明通过以下技术方案实现该目的：

一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液，由DC细胞分泌的蛋白的浓缩液和生理 盐水组成。

进一步的，所述生理盐水中含有1～5％的人血白蛋白和0.01～0.05％的氢化可的松溶液。

作为优选的，所述DC细胞分泌的蛋白的浓缩液与生理盐水的体积比为1:2。

一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液的制备方法，包括以下步骤：

1)采集患者自身外周血50mL，离心后收集血浆；

2)将下层血细胞用生理盐水进行稀释，再将稀释液加入已有Ficoll分离液的sepmate离 心管中，300～500g离心10-20min，血细胞与生理盐水的体积比为1:2～2:1；

3)将步骤2)中离心后的上层液体从离心管中倒出，再加入15～25mL的RPMI1640培 养基重悬细胞，300～500g离心10-20min；

4)分别采用抗CD14抗体和抗CD86的抗体磁珠分选出单核细胞和DC细胞；

5)向分选出的单核细胞和DC细胞中加入X-VIVO15培养基进行培养，细胞密度为5～ 10×10⁵/mL；同时向培养基中加入100-1000U/mL的IL-4和100-1000U/mL的GM-CSF，每 日观察DC细胞的形态；

6)分别在培养的第6天和第8天向培养基中添加50-500U/mL的TNF-α以促进DC细胞 的成熟；

7)培养10天后收集DC细胞和培养上清，将DC细胞进行裂解；

8)将裂解后的DC细胞内容物和培养上清中的蛋白浓缩70～90倍，将浓缩液稀释在含 有1～5％的人血白蛋白(HSA)和0.01～0.05％的氢化可的松溶液的生理盐水溶液中，浓缩 液与生理盐水的体积比为1:2，制得DC细胞蛋白滴眼液。

作为优选的，在培养过程中每隔两日计数细胞一次，并补加一定量的X-VIVO15培养基、 IL-4和GM-CSF。

其中，在培养10天后，抽取1×10⁶的细胞进行DC细胞的流式检测。

一种DC细胞蛋白滴眼液用于治疗细菌性结膜炎的用途。