[发明专利]一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液，由DC细胞分泌的蛋白的浓缩液和生 理盐水组成。

2.如权利要求1所述的治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液，所述生理盐水中含有 1～5％的人血白蛋白和0.01～0.05％的氢化可的松溶液。

3.如权利要求1所述的治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液，所述DC细胞分泌的 蛋白的浓缩液与生理盐水的体积比为1:2。

4.一种治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液的制备方法，包括以下步骤：

1)采集患者自身外周血50mL，离心后收集血浆；

2)将下层血细胞用生理盐水进行稀释，再将稀释液加入已有Ficoll分离液的sepmate离 心管中，300～500g离心10-20min，血细胞与生理盐水的体积比为1:2～2:1；

3)将步骤2)中离心后的上层液体从离心管中倒出，再加入15～25mL的RPMI1640培 养基重悬细胞，300～500g离心10-20min；

4)分别采用抗CD14抗体和抗CD86的抗体磁珠分选出单核细胞和DC细胞；

5)向分选出的单核细胞和DC细胞中加入X-VIVO15培养基进行培养，细胞密度为5～ 10×10⁵/mL；同时向培养基中加入100-1000U/mL的IL-4和100-1000U/mL的GM-CSF，每 日观察DC细胞的形态；

6)分别在培养的第6天和第8天向培养基中添加50-500U/mL的TNF-α以促进DC细胞 的成熟；

7)培养10天后收集DC细胞和培养上清，将DC细胞进行裂解；

8)将裂解后的DC细胞内容物和培养上清中的蛋白浓缩70～90倍，将浓缩液稀释在含 有1～5％的人血白蛋白(HSA)和0.01～0.05％的氢化可的松溶液的生理盐水溶液中，浓缩 液与生理盐水的体积比为1:2，制得DC细胞蛋白滴眼液。

5.如权利要求4所述的治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液的制备方法，在培养过 程中每隔两日计数细胞一次，并补加一定量的X-VIVO15培养基、IL-4和GM-CSF。

6.如权利要求4所述的治疗细菌性结膜炎的DC细胞蛋白滴眼液的制备方法，在培养10 天后，抽取1×10⁶的细胞进行DC细胞的流式检测。

7.一种DC细胞蛋白滴眼液用于治疗细菌性结膜炎的用途。