[发明专利]ADRB2，GRK5基因多态性的检测方法和临床应用

说明书

技术领域：

本发明属于生命科学领域，涉及医学和生物技术，具体是提供不同检测方法(Taqman探针分型和 改良测序的方法等)同时对β受体信号通路相关基因ADRB2，GRK5上的3个SNP位点(ADRB2： rs1042713，rs1042714以及GRK5：rs2230349)进行快速准确的基因分型，同时提供根据基因型预判β 受体阻滞剂疗效及预后评估的方法。

背景技术：

心力衰竭(心衰)是包括高血压、冠心病、心肌病在内的多种心脏疾病的终末阶段。因为人口老 龄化的趋势和急性心肌梗死早期再灌注干预后存活患者的增加，使得心衰病人人数迅速增长，心衰已 成为社会巨大的负担。随着研究的深入，人们已逐渐认识到交感神经的过度兴奋及相关神经体液因子 的过度激活在心衰的发生、进展中起到重要作用。β肾上腺素能系统是维持心脏的正常功能和影响心 衰的结构功能改变的重要信号通路，主要由七次跨膜的G蛋白偶联受体(β1型受体ADRB1和β2 型受体ADRB2)—腺苷酸环化酶(AC)—环磷酸腺苷(cAMP)—蛋白激酶A(PKA)组成， 介导心脏的变时变力作用。G蛋白偶联受体激酶2型和5型(GRK2，GRK5)能磷酸化活化的β受体， 抑制其下游的信号的激活，在心衰的病理过程中对β受体信号通路起到调节作用。而在心衰时，机体 通过代偿性的激动β肾腺素能系统代偿心脏泵血功能的下降。过度的活化却引起了心肌细胞的重构和 凋亡，进一步加重心脏功能的恶化。

β受体阻滞剂因能抑制心衰时过度活化的肾上腺素能系统成为了心衰治疗的革新。超过10000例 患者的20多个安慰剂对照临床试验对β受体阻断剂的治疗效果进行了评价。结果表明：β受体阻滞剂 的使用不仅能改善心脏功能，更重要的是改善心脏重构和降低死亡和再住院的联合终点。但临床试验 同时也报道了β受体的治疗效果存在个体异质性，具体表现为并非所有的个体都能从β受体阻滞剂的 治疗中获益和不同人种对β受体阻滞剂的治疗获益并不完全相同。有研究报导，编码β肾腺素能系统 的重要信号分子(ADRB1，ADRB2，GRK5等)的基因多态性参与了这个β受体阻滞剂相关的临床表 型的异质性。GRK5基因多态性位点Gln41Leu(导致41号氨基酸由谷氨酰胺变成了亮氨酸)在欧洲 人种的次要等位频率约为2％，而在非洲人种的次要等位频率为32.6％。有趣的是，Leu41天然的模拟 了β受体阻滞剂的抑制效应，从而使Leu41型患者在无药物治疗时比Gln41型患者的生存率更高，而 在β受体阻滞治疗的情况下却不能再从β受体阻滞剂治疗中获益。于是在整体层面形成了非洲人对β 受体阻滞剂的治疗反应明显比欧洲人群差的表现。ADRB1基因多态性(Arg389Gly)也通过改变β受 体信号通路对激动剂和阻滞剂的反应差异而影响了ADRB1Arg389Gly位点不同基因型的人对β受体 阻滞剂的治疗效果不同。

ADRB2-Arg16Gly(rs1042713)，ADRB2-Gln27Glu(rs1042714)和GRK5-Arg304His(rs2230349) 是ADRB2和GRK5基因上三个多态性位点。rs2230349位点是否影响β受体阻滞剂相关表型尚无报道。 有一项735例冠心病病人的研究评估了rs1042713对β受体阻滞剂对冠心病患者的治疗效果，在560 例服用β受体阻滞剂的患者中，其多态性影响三年生存率。但对于心衰人群，尚无有力的临床证据， 特别国人是否具有种族特异性的临床表型仍未知。另一方面，根据文献报道，目前基于β受体肾上腺 素能通路基因多态性检测方法主要为测序的方法，因操作较繁琐，成本较高，不能满足临床低成本、 高效准确检测的需求。

发明内容：

为填补现有技术的空白，本发明旨在提供针对以上ADRB2-Arg16Gly(rs1042713)， ADRB2-Gln27Glu(rs1042714)和/或GRK5-Arg304His(rs2230349)3个多态性位点快速准确的联合 检测方法，包括但不限于Taqman探针基因分型和改良测序的方法，同时提供分型结果指导临床心衰 患者生存预后和药物疗效评估的应用。

为此，本发明提供以下技术方案：