[发明专利]单域抗原结合性分子的纯化方法

权利要求书

1.一种从含有包含一个或多个纳米抗体分子的单域抗原结合性(SDAB)分子和一种或 多种污染物的混合物分离或纯化所述SDAB分子的方法，包括：

将所述混合物与基于阳离子交换的载体在允许所述SDAB分子结合或吸附至所述载体 的条件下接触；

去除一种或多种污染物；和

从所述载体选择性洗脱所述SDAB分子，

其中所述SDAB分子不具有互补性抗体可变域或免疫球蛋白Fc区。

2.权利要求1的方法，其中所述去除一种或多种污染物的步骤包括在所述SDAB分子保 持与所述载体结合的条件下清洗所述结合的载体。

3.权利要求1-2中任一项的方法，其中所述SDAB分子是在哺乳动物宿主细胞优选在CHO 细胞中产生的重组蛋白。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述混合物中的污染物包含一种或多种高分子 量蛋白聚集体、宿主细胞蛋白或DNA。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中将所述SDAB分子纯化至至少85％、90％、95％、 96％、97％、98％、99％或更高的纯度。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述方法包括：

将所述含有SDAB分子和一种或多种污染物的混合物与阳离子交换(CEX)树脂接触，其 中所述CEX树脂显示至少约10g/L、20g/L、30g/L、40g/L、50g/L或60g/L的容量；

允许所述SDAB分子流过所述载体，用至少一种阳离子交换清洗缓冲液清洗所述载体； 和

用洗脱缓冲液洗脱所述SDAB分子。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述用于装载柱的条件介质(CM)的电导率为约 15-5mS/cm，例如12-9mS/cm并且将装载条件的pH调节至小于约6、5.5、5、4.5、4.4、4.3、4.2、 4.1、4、3.9、3.8或3.7，例如等于或小于约4.5。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述洗脱缓冲液等于或小于约50mM氯化钠，并且 具有约5.5-7.2的pH。

9.权利要求1-8中任一项的方法，进一步包括将所述混合物与羟基磷灰石树脂接触并 从所述羟基磷灰石树脂选择性洗脱所述SDAB分子。

10.权利要求9的方法，进一步包括用平衡缓冲液预处理所述混合物并允许所述经预处 理的混合物流过羟基磷灰石树脂。

11.权利要求10的方法，其中将所述混合物与羟基磷灰石树脂接触的步骤和所述洗脱 步骤是在包含约1-20mM磷酸钠和约0.2-2.5M氯化钠、pH为约6.4-7.6的缓冲溶液中进行的。

12.权利要求10或11的方法，其中所述平衡缓冲液包含约1-20mM的磷酸钠，约0.01- 2.0M氯化钠、约0-200mM精氨酸、约0-200mMHEPES，pH为约6.2-8.0。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述纯化的SDAB分子含有少于10％高分子量 聚集体。