[发明专利]一种利用CLSM评价高得率浆纤维间结合面积的方法

权利要求书

1.一种利用CLSM评价高得率浆纤维间结合面积的方法，其特征在于，步骤为：

(1)将商品高得率浆在去离子水中浸泡，浸泡后的高得率浆进行消潜处理，消潜完成后对高得率浆进行解离处理，鲍尔筛分仪对经解离处理后的高得率浆进行分级处理，并收集筛分获得的四个级分的高得率浆纤维，均衡水分后测定固含量，备用；

(2)取适量某级分高得率浆纤维在去离子水中浸泡一周，用一定浓度的荧光染料溶液染色，并洗去浮色，备用；

(3)在放大镜下利用解剖针在载玻片上将荧光染色后的纤维搭建纤维结合模型，盖上盖玻片并封片；

(4)使用共聚焦激光扫描显微镜CLSM对搭建好的纤维结合模型进行观察和光学切片，获取纤维结合模型中两根纤维结合区域的焦平面图片；

(5)根据所获得纤维结合区域的焦平面图片利用图形软件计算纤维结合模型中纤维间的结合面积。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光染料为吖啶橙。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述吖啶橙溶液的浓度为5×10^-5～6×10^-5mol/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的染色方法为：称取绝于量为0.2g的湿浆，放入用锡箔纸包裹的50mL玻璃瓶中，向玻璃瓶中加入40mL荧光染料溶液，加入适量玻璃珠后盖上橡胶塞均匀摇晃30min，静置，待纤维沉淀后用医用注射器移走上层清液，加去离子水依照上述步骤清洗三次，第二次和第三次的摇晃时间为5min，最后加去离子水盖塞备用。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：制备好的纤维结合模型与用共聚焦激光扫描显微镜CLSM观察时间间隔小于15min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：封片时采用封片剂封片，所述封片剂为快速风干型。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述高得率浆在水中浸泡的条件为：每60g绝干浆量添加1L去离子水。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述消潜时条件为浆浓2～5％，温度80～90℃，搅拌时间20～30min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述使用共聚焦激光扫描显微镜CLSM对搭建好的纤维结合模型进行观察的步骤为：(1)按照仪器说明书要求开启共聚焦激光扫描显微镜CLSM，选择波长为488nm的激光作为激发光源；(2)先利用4倍倍物镜寻找并锁定纤维结合模型，然后逐级使用高倍物镜观察纤维结合模型，最终切换至40倍物镜，调节焦平面寻找纤维结合模型中两根纤维结合区域的最佳焦平面，最后设置对纤维结合模型进行光学切片的相关参数；(3)保存数据，利用图形处理软件标注纤维结合模型中两根纤维间的结合区域轮廓并计算结合面积。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：设置对纤维结合模型进行光学切片的相关参数时，应以纤维结合区域最佳焦平面为基准设置CLSM扫描并进行光学切片的最高利最低位置，并设置合适的扫描步骤和相应跨度。