[发明专利]一种利用细胞色素C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度的方法

说明书

本发明公开了一种利用细胞血素C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度的方法，其包括如下步骤：1）取不同质量的表面活性剂分别溶于磷酸盐缓冲液中，获得一系列具有一定浓度梯度的表面活性剂溶液；2）向步骤1）所得各溶液中加入细胞色素C、愈创木酚和双氧水，于25－50℃开始酶促反应，记录愈创木酚氧化初始速度；3）以表面活性剂浓度为横坐标，以愈创木酚氧化初始速度为纵坐标进行作图，添加移动平均趋势线幂趋势线和移动平均趋势线，通过改变移动平均趋势线中的移动平均周期使移动平均趋势线与幂趋势线相切，切点对应的表面活性剂浓度即为临界胶束浓度。本发明具有工作pH、温度范围广，操作简便，灵敏度高等优点。

技术领域

本发明属于表面活性剂临界胶束浓度测定技术领域，具体涉及一种利用细胞色素C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度的方法。

背景技术

表面活性剂是由极性头部和非极性尾部组成的双亲极性分子，它既可以与极性官能团，又可以与非极性官能团相互作用。在极性溶剂中，当表面活性剂浓度逐渐增大到一定浓度时，许多表面活性剂分子会自发聚焦成胶束，通常将表面活性剂形成胶束所需的最低浓度定义为该表面活性剂的临界胶束浓度（CMC）。

临界胶束浓度CMC可以表征表面活性剂的表面活性，也是溶液性质发生变化的临界点，其理化性质在形成胶束前后发生显著变化。因此CMC值对表面活性剂的研究极其重要，是其具有重要参考价值的数据。

现有的研究报道中大多是借助理化性质的变化来表征表面活性剂的CMC，如：表面张力法、电导法、染料法、光散射法、增容作用法等。使用不同的理化性质方法对表面活性剂CMC测定时，由于灵敏度以及所测量的表面活性的响应范围不同等因素的影响，往往造成测定的CMC值有较大差异。此外，现有的测定方法常需要使用操作较为复杂、价格昂贵的仪器，不利于推广。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种利用细胞色素C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种利用细胞色素C自组装过氧化物酶测定表面活性剂临界胶束浓度的方法，其包括如下步骤：

1）取不同质量的表面活性剂分别溶于磷酸盐缓冲液中，获得一系列具有一定浓度梯度的表面活性剂溶液；

2）向步骤1）所得各溶液中加入细胞色素C；

3）向步骤2）所得各溶液中加入愈创木酚；

4）向步骤3）所得各溶液中加入双氧水，于25－50℃开始酶促反应，同时记录愈创木酚氧化初始速度；

5）以表面活性剂浓度为横坐标，以愈创木酚氧化初始速度为纵坐标，在excel中进行作图，添加移动平均趋势线幂趋势线和移动平均趋势线，通过改变移动平均趋势线中的移动平均周期使移动平均趋势线与幂趋势线相切，切点对应的表面活性剂浓度即为临界胶束浓度。

具体的，酶促反应中（即以添加双氧水后所获得的体系为基准，来计量体系中表面活性剂、细胞色素C、愈创木酚以及H₂O₂的浓度），细胞色素C的浓度为2－16 μmol/L；愈创木酚的初始浓度为1.5 mmol/L；双氧水以H₂O₂计，H₂O₂的初始浓度为0.5 mmol/L。

优选的，步骤4）中所述表面活性剂可以为十二烷基磺酸钠（SDS）、十烷基硫酸钠（SDeS）、十二烷基肌氨酸钠（SLS）、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基三甲基氯化铵（DTAC）或十二烷基三甲基溴化铵（DTAB）等。