[发明专利]嵌合抗原受体和使用方法

说明书

本发明涉及包含两种多肽的嵌合抗原‑受体多肽异二聚体，其中，所述第一多肽包含主要组织相容性复合体Iα链的胞外部分，且所述第二多肽包含β2‑微球蛋白结构域，或者所述第一多肽包含主要组织相容性复合体IIα链的胞外部分，且所述第二多肽包含主要组织相容性复合体IIβ链。所述多肽中的一个进一步包含T细胞受体α链的跨膜结构域、铰链区和胞内结构域，且另一个包含T细胞受体β链的跨膜结构域、铰链区和胞内结构域，及共价连接到所述胞外MHC结构域的另外的抗原‑肽。本发明进一步涉及使用本发明的异二聚体鉴定TCR可识别肽序列的方法。

大部分T细胞表达αβT细胞受体(TCR)，并识别在其他细胞上的以由主要组织相容性复合体(MHC)呈递的肽(表位)的形式的抗原。细胞毒性T淋巴细胞的TCR识别在体内几乎每个细胞表面上的由MHC I类分子展示的表位。辅助T细胞的TCR识别在抗原-呈递免疫细胞表面上的由MHC II类分子展示的表位，所述抗原-呈递免疫细胞包括巨噬细胞、树突细胞和B细胞。通过T细胞有效识别表位涉及另外的T细胞表面糖蛋白：在细胞毒性T淋巴细胞上的CD8(CD8⁺T细胞)，和在辅助T细胞上的CD4(CD4⁺T细胞)，它们分别结合MHC I类和MHC II类分子。TCR与表位的结合可导致信号被发送到T淋巴细胞的细胞核以诱导T细胞应答。

T细胞抗原特异性的明确和有效的鉴定对于开发有效的免疫疗法和诊断工具是非常有希望的。特别是：

-它可以有助于评估过继性T细胞疗法的安全性，

-它可以使治疗自身免疫性疾病、癌症和新疫苗开发的新方法成为可能。

然而，TCR以低亲和力结合MHC-肽复合体，这使得噬菌体展示方法和酵母展示方法无效。替代方法，如位置扫描组合性肽文库的筛选，利用TCR的交叉反应性的优点并使用肽库来定义导致T细胞激活的基序。除了类似的亲和力约束之外，这些繁琐的方法遭受高比例的假阳性结果。由于询问随机肽序列，所鉴定的肽基序是不明确的或与天然蛋白质没有明显的同源性。

本发明的潜在问题是提供用于在体外和体内使用的CD4⁺和CD8⁺T细胞的抗原肽特异性的直接和灵敏、无偏差的鉴定的手段。此问题通过独立权利要求的主题解决。

术语和定义

氨基酸序列从氨基到羧基末端给出。序列位置的大写字母指单字母代码中的L-氨基酸(Stryer，Biochemistry，第3版，第21页)。氨基酸序列位置的小写字母指相应的D-或(2R)-氨基酸。

在本发明的背景下，术语同一性或序列同一性以其在遗传学和生物信息学领域中已知的含义使用；它们是指表示通过逐个位置的序列比对结果的单个定量参数。序列比对方法是本领域已知的；公共可获得的BLAST算法是一个实例。

用于氨基酸序列比对的一个所述实例是使用默认设置的BLASTP算法，如：期望阈值：10；字长：3；查询范围内的最大匹配：0；矩阵：BLOSUM62；空位代价：存在11，延伸1；组成调整：条件性组成得分矩阵调整。在没有进一步细节的情况下，这些设置用于确定以下给出的氨基酸序列同一性值。

用于核酸序列比对的一个所述实例是使用默认设置的BLASTN算法：期望阈值：10；字长：28；查询范围内的最大匹配：0；匹配/不匹配得分：1.-2；空位代价：线性。在没有进一步细节的情况下，这些设置用于确定以下给出的核酸序列同一性值。

在本说明书的背景下，术语主要组织相容性复合体(MHC)以其在细胞生物学和生物化学领域中已知的含义使用；它是指以适合于被T细胞受体识别的方式展示肽、蛋白质的一部分的细胞表面分子。在本说明书的背景下，被免疫系统识别的肽被称为表位或抗原肽或寡肽。

存在两个主要类别的MHC分子：I类和II类。