[发明专利]嵌合抗原受体和使用方法

权利要求书

1.一种用于鉴定TCR可识别肽序列的方法，其包括：

i.提供多个哺乳动物细胞，其中

-所述多个哺乳动物细胞中的每一个细胞，表达文库的成员；

-所述文库的各成员编码转基因抗原受体；

-所述转基因抗原受体包含：

·MHC1或MHC2的胞外结构域，

·包含在所述胞外结构域内的寡肽，其中，所述寡肽对于文库的各成员而言是不同的，并且其中，所述寡肽以适于被T细胞受体识别的方式呈递，

·TCR的跨膜结构域，及

·TCRα或TCRβ链的胞内结构域；

-所述转基因抗原受体与报告蛋白是功能上关联的，由此，同源T细胞受体与所述转基因抗原受体的结合导致所述报告基因的激活，

ii.使所述多个哺乳动物细胞与T淋巴细胞的制备物接触，

iii.根据可检测报告蛋白的水平，从所述多个哺乳动物细胞中分离显示可检测报告蛋白的细胞，产生激活细胞，

iv.从所述激活细胞中分离DNA，及

v.对编码包含在所述转基因抗原-受体中的所述寡肽序列的分离的DNA进行测序。

2.一种用于鉴定TCR可识别肽序列的方法，其包括：

i.提供哺乳动物细胞，其中

-所述哺乳动物细胞表达转基因抗原受体；

-所述转基因抗原受体分子包含

·包含以适合于被T细胞受体识别的方式呈递的寡肽的MHC1或MHC2的胞外结构域，

·TCR的跨膜结构域，及

·TCRα或TCRβ链的胞内结构域，

-所述转基因抗原受体与报告蛋白是功能上关联的，由此，同源T细胞受体与所述转基因抗原受体的结合导致所述报告基因的激活，

ii.使所述哺乳动物细胞与T-淋巴细胞的制备物接触，从而激活所述报告基因，产生激活的哺乳动物细胞，

iii.从所述激活的哺乳动物细胞中分离DNA，及

iv.对编码包含在所述转基因嵌合抗原-受体中的所述寡肽序列的分离的DNA进行测序。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述转基因抗原受体是包含第一多肽和第二多肽的嵌合抗原-受体多肽异二聚体，其中

a.所述第一多肽包含MHC I类α链的胞外部分，且所述第二多肽包含β2-微球蛋白结构域，或者

b.所述第一多肽包含MHC II类α链的胞外部分，且所述第二多肽包含MHC II类β链的胞外部分，

其中，所述第一多肽和所述第二多肽链中的至少一个另外包含与所述胞外MHC结构域共价连接的寡肽；

所述第一多肽和所述第二多肽中的一个进一步包含T细胞受体α链的铰链区、跨膜结构域和胞内结构域或胞内尾区，并且所述第一多肽和所述第二多肽中的另一个包含T细胞受体β链的铰链区、跨膜结构域和胞内结构域。

4.一种包含第一多肽和第二多肽的嵌合抗原-受体多肽异二聚体，其中

a.所述第一多肽包含MHC I类α链的胞外部分，且所述第二多肽包含β2-微球蛋白结构域，或者

b.所述第一多肽包含MHC II类α链的胞外部分，且所述第二多肽包含MHC II类β链的胞外部分，

所述第一多肽和所述第二多肽中的一个进一步包含T细胞受体α链的铰链区、跨膜结构域和胞内结构域或胞内尾区，并且所述第一多肽和所述第二多肽中的另一个包含T细胞受体β链的铰链区、跨膜结构域和胞内结构域。

5.如权利要求4所述的嵌合抗原-受体多肽异二聚体，其中，所述第一多肽和所述第二多肽链中的至少一个另外包含能够被T细胞受体识别的寡肽，所述寡肽与所述胞外MHC结构域共价连接。

6.如权利要求4或5所述的嵌合抗原-受体多肽异二聚体，其中，MHC分子的胞外部分包含

i.所述第一多肽的MHC I类α1和α2和α3结构域形成部分中的每一个，或

ii.所述第一多肽的MHC II类α1和MHC II类α2结构域形成部分，及所述第二多肽的MHCII类β1和MHC II类β2结构域形成部分，

和/或

iii.其中，所述MHC分子的胞外部分选自在IMGT HLA数据库中阐明的人类主要组织相容性复合体基因家族HLA的成员。