[发明专利]低分子量肽或蛋白质的纳米沉淀物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及肽或蛋白质纳米沉淀物或肽或蛋白质和金属离子(优选二价金属离子)纳米共沉淀物的非变性制备方法，其中肽或蛋白质具有低分子量，并且涉及可通过这种方法获得的纳米沉淀物或纳米共沉淀物。本发明还涉及一种药物组合物，特别是控释药物组合物，其包含所述纳米沉淀物或纳米共沉淀物，并且涉及所述药物组合物在人和动物健康领域中的用途。

背景技术

肽和蛋白质是复杂的，高度有机化的结构，对它们的环境高度敏感，并且可容易地变性。肽或蛋白质的变性通常导致活性的确定性或暂时性丧失。然而，迄今已知的用于沉淀肽或蛋白质的方法是引起变性的，因为它们包括对肽/蛋白质的结构潜在有害的条件，因此使它们失去活性，诸如高温，快速搅拌或与疏水性表面、水性/有机界面或洗涤剂接触的条件。

肽或蛋白质，特别是治疗性肽或蛋白质的纳米沉淀使得能够例如改善它们在受体生物体中的释放特征及它们的生物利用度。它还能实现浓缩的肽/蛋白质悬浮液的冻干和高度富集肽或蛋白质同时具有低的或没有粘度的药物组合物的制备，所述药物组合物包括在不存在变性聚集的情况下获得的纳米沉淀物。

在文献中存在蛋白质纳米沉淀的方法，例如蛋白质去溶剂化技术，其产生尺寸通常大于一微米的蛋白质沉淀物。然而，这些方法通常导致蛋白质的变性，或不可能在没有所必需的除了非溶剂之外的聚合物的情况下获得蛋白质沉淀物。

例如，专利申请WO 2009/043874公开了一种制备平均直径为50至200nm的泊洛沙姆-蛋白纳米颗粒的方法，其中蛋白质的分子量优选高于8kDa，并且不变性。所述纳米颗粒是泊洛沙姆-蛋白复合物；因此除了非溶剂之外的另外的聚合物是获得它们所必需的。

因此，亟需开发用于低分子量肽或蛋白质的非变性纳米沉淀的技术，所述低分子量肽或蛋白质不与促进它沉淀或与金属离子(优选二价金属离子)共沉淀的另一分子复合。肽或蛋白质优选是治疗性肽或蛋白质，例如胰岛素。

发明内容

在本发明的上下文中，本发明人发现了一种分子量为20kDa或更低，优选15kDa或更低，有利地为10kDa或更低，更有利地为8kDa或更低的肽或蛋白质的纳米沉淀物的非变性制备的新方法，使得能够获得非变性肽或蛋白质的纳米沉淀物，或所述非变性肽或蛋白质和金属离子(优选二价金属离子)的纳米共沉淀物，可将其掺入药物组合物中，优选控释药物组合物中。

本发明能够在温和、非变性条件下获得低分子量肽或蛋白质的纳米沉淀物或低分子量肽或蛋白质和金属离子的纳米共沉淀物。它包括接触低分子量肽或蛋白质的溶液，肽或蛋白质的有机非溶剂，例如选自低分子量聚乙二醇或聚乙二醇衍生物的有机二醇，特别是PEG 550，以及选自己二醇、丁烷-1,4-二醇、戊烷-1,5-二醇、乙基己二醇、2-甲基戊烷-2,4-二醇(己二醇)、3-环戊烯-1,2-二醇、顺-4-环戊烯-1,3-二醇、反-1,4-二噁烷-2,3-二醇、1,3-二噁烷-5,5-二甲醇、(3S,4S)-吡咯烷-3,4-二醇、(3R,4R)-(-)-1-苄基-3,4-吡咯烷二醇、(3S,4S)-(+)-1-苄基-3,4-吡咯烷二醇、3-环戊烯-1,2-二醇、2-甲基-丁烷-1,3-二醇的有机二醇。

根据本发明的纳米沉淀方法能够获得可用作用于单次肠胃外施用的药用产品的肽或蛋白质纳米沉淀物或纳米共沉淀物，使得所述肽或蛋白质的血浆浓度在治疗窗内的持续时间大于未按照本发明的制备方法进行制备的相同肽或蛋白质在单次胃肠外施用之后的血浆浓度在治疗窗内的持续时间。因此，根据本发明的纳米沉淀能够控制肽或蛋白质的释放速率，特别是为了获得生物活性形式的肽或蛋白质的缓释持续至少2天，优选2天至几个月。

根据本发明的纳米沉淀还能够制备高度富集所述肽或蛋白质同时具有低粘度的药物组合物。药物组合物的低粘度，特别可用于其肠胃外施用，特别是其非静脉内肠胃外施用。

在第一方面中，本发明涉及平均直径小于1μm的肽或蛋白质纳米沉淀物或肽或蛋白质和金属离子纳米共沉淀物的非变性制备方法，其包括以下步骤：

a)制备肽或蛋白质的水溶液、肽或蛋白质的非溶剂以及任选的水溶性金属盐的混合物；

b)温和搅拌在步骤a)中获得的混合物；

c)固液分离在步骤b)中获得的混合物；和

d)任选地，收集肽或蛋白质纳米沉淀物或肽或蛋白质和金属离子纳米共淀物，