[发明专利]具有修饰的轻链特异性的肉毒杆菌神经毒素及其生产方法

说明书

本申请要求享有于2014年8月12日提交的申请号为62/036,412的美国临时申请和于2015年4月2日提交的申请号为62/142,400的美国临时申请的优先权。这些和所有其它参考的外部材料通过引用整体并入本文。当通过引用并入的参考文献的定义或术语的使用与本文所提供的该术语的定义不一致或相反时，以本文提供的该术语的定义为准。

技术领域

本发明的领域为肉毒杆菌神经毒素。

背景技术

下面的描述包括有助于理解本发明的信息。但这里并非承认，本文所提供的任何信息为现有技术或与现有要求保护的发明有关，或本文明确或隐含引用的任何披露为现有技术。

来自疾病特异性的细胞类型的分泌过多是许多内分泌、免疫和分泌性疾病的特征。例如，肥大细胞的分泌支持严重过敏反应、过敏反应、自身免疫和其它炎症性疾病，而来自上皮细胞的粘蛋白的分泌引起囊性纤维化(CF)和慢性阻塞性肺病(COPD)。通过靶向分泌所需的核心机制来减少分泌能够为这样的疾病提供新的且有效的治疗方式。这样的来自疾病特异性细胞类型的分泌由SNARE(可溶性N-乙基马来酰亚胺—敏感因子附着蛋白受体)蛋白介导，所述SNARE蛋白是膜相关蛋白家族，其形成复合物，所述复合物介导与质膜的囊泡融合以及随后囊泡内容物的释放。

非神经元SNARE对于内分泌和代谢途径是至关重要的，所述内分泌和代谢途径调节激素、生长因子和其他信号分子的释放。这样的分泌途径中的功能障碍导致疾病。例如，所述非神经元SNARE蛋白SNAP-23对于多个疾病途径的分泌是至关重要的，所述多个疾病途径的分泌包括关节炎中的IL-6(白细胞介素-6)和TNF(肿瘤坏死因子)的释放，COPD、CF和特发性支气管扩张中的粘蛋白分泌过多，止血中的血小板分泌，糖尿病中的胰岛素分泌，血压调节中的肾素释放以及在肿瘤细胞侵袭中的基质降解酶的释放。类似地，非神经元SNARE蛋白SNAP-29被认为是神经递质释放的负调节剂，并且是细胞内蛋白质转运途径的关键组成部分，SNAP-29的突变导致称为CEDNIK的神经皮肤综合症。

通过调节SNARE蛋白的活性阻断分泌已经通过以下事实被证明了：通过使用肉毒杆菌神经毒素(BoNT)降解介导神经递质释放的神经元SNARE蛋白，从而阻断神经递质从运动神经元的释放。肉毒杆菌神经毒素(BoNT)，是由细菌肉毒杆菌(Clostridium botulinum)产生的锌内肽酶家族，是一类被FDA批准用于广泛的治疗和美容应用的功能强大的药物。有七个广泛认知的BoNT血清型(BoNT/A～BoNT/G)，和最近报告的血清型H。BoNT切割在运动神经元中发现的一种或多种可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(SNARE)蛋白，阻断神经递质的释放，并导致弛缓性麻痹。

尽管在已知的最致命的天然物质中，BoNT被广泛用于各种药物和美容应用，包括颈部肌张力障碍、多汗症、斜视、眼睑痉挛、眉间皱纹和慢性偏头痛。在中毒期间，BoNT经由该分子的H链部选择性地结合并进入运动神经元。在进入运动神经元时，该分子的L链部被释放，并以高度序列特异性的方式降解受控的神经递质分泌所需的靶向SNARE蛋白。这导致与治疗运动神经元相关联的肌肉收缩的特定且长期的减少。与运动神经元的结合和神经递质释放中利用的SNARE的降解都是高度特异性的。例如，BoNT/A是大多数基于BoNT的药物的基础，其通过特异性切割蛋白SNAP-25来阻断来自暴露的运动神经元的分泌，但不与其它细胞类型结合或切割其它(例如那些在非神经元细胞中表达的)SNAP-25同种型。之前，BoNT已通过H链修饰被重定向到了非神经元细胞类型。然而，重定向的BoNT的治疗效用受到神经元SNARE蛋白的水解特异性的限制。因此，BoNT的治疗用途目前限于神经元相关的疾病/病症，对于治疗非神经元分泌紊乱不起作用。

因此，仍然存在对在非神经元细胞中的具有治疗性分泌抑制作用的BoNT和/或修饰的BONT的需要。

发明内容

本发明的主题在于提供一种装置、系统以及方法。

下面将通过优选实施例和附图的详细描述来具体阐述本发明主题的各种目的、特征、方面和优点，附图中的相同标记表示相同组成部分。

附图说明