[发明专利]因子X的活化

说明书

本文公开了用于活化因子X的方法和系统。

背景技术

凝血因子X，也称为FX、F10、Eponym St-P因子和凝血酶原激酶，是活化凝血酶的维生素K-依赖性血浆蛋白酶。最初在肝脏中作为单链前体合成的FX是通过内源和外源途径活化以形成由二硫键-连接的轻链和重链组成的活化的FX(FXa)。所述轻链含有γ-羧基谷氨酸(Gla)结构域和两个表皮生长因子样(EGF样)结构域，而所述重链对应于丝氨酸蛋白酶结构域。FXa有助于凝血酶原复合体浓缩物的功能并已被鉴定为因子8旁路活性(FEIBA)中的活性成分。FEIBA可用于治疗血友病患者，其产生针对FVIII或FIX的抑制性抗体。

虽然FX可从人血浆中纯化或重组产生，但是仅有其活化状态(FXa)能影响血液凝固过程。该活化是因在FX重链上的Arg52-Ile53肽键的断裂而产生，从而释放该活化肽。FX活化的标准方法通常采用外源性试剂，例如蛋白酶。

发明内容

本文公开的方面包括在不添加外源性试剂的情况下活化因子X(FX)的方法。在一个实施方案中，FX是通过将FX与色谱树脂缔合而活化的。

其他方面包括用于活化FX的系统。在一个实施方案中，所述系统包括在液体介质中的FX和阴离子交换色谱树脂。在一个实施方案中，所述液体介质是水性的。

各方面包括在将所述FX载样至所述色谱树脂的步骤开始后2小时洗脱所述活化的FX。

各方面包括在将所述FX载样至所述色谱树脂的步骤开始后5小时洗脱所述活化的FX。

各方面包括在将所述FX载样至所述色谱树脂的步骤开始后10小时洗脱所述活化的FX。

各方面包括在将所述FX载样至所述色谱树脂的步骤开始后20小时洗脱所述活化的FX。

本文公开的其他方面包括以8mS/cm或更小的电导率结合所述FX。

本文公开的其他方面包括在8-10的pH结合所述FX。

本文公开的其他方面包括以每毫升阴离子交换树脂大于0.5mg FX装载所述FX。在一些方面，所述结合和洗脱步骤在大于8℃的温度下进行。

本文公开的方法包括洗脱缓冲液，其包含二价阳离子或抗衡离子。在一些方法中，所述抗衡离子是氯离子、乙酸根、柠檬酸根、硫酸根或磷酸根中的至少一种。在本文公开的一些方法中，所述洗脱缓冲液中的二价阳离子或抗衡离子或这两者的浓度随时间增加。

本文公开的方面包括在25℃具有1-100mS/cm的电导率的洗脱缓冲液。其他方面包括离子交换配体，其为季铵[Q]、二乙基氨基乙基[DEAE]、二乙基氨基丙基[ANX]或伯胺中的至少一种。其他方面包括离子交换材料，其是衍生自聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、聚乙烯吡啶、交联聚(苯乙烯-二乙烯基苯)、琼脂糖和交联琼脂糖中至少一种的基质。在一些方面，所述离子交换材料为阴离子交换材料。