[发明专利]使用双膦酸盐、抗CD3抗体和IL‑2扩增T细胞群体

说明书

发明领域

本发明涉及用于扩增T细胞群体，包括γδT细胞的方法。本发明还涉及包含扩增的T细胞的药物组合物，及其用于治疗传染病、自身免疫病和恶性疾病的用途。

发明背景

尽管科学和医学进步，癌症和传染病仍然是全世界，并且主要是发达国家中的主要死因。免疫系统在控制这些疾病中的作用是已知的，且其操作已成为极为可能的治疗策略。

基于细胞的免疫疗法被证明对某些癌症有效。发现对T细胞群体的操作引起疾病退化和肿瘤细胞死亡。例如，自体肿瘤浸润淋巴细胞用于治疗患转移性黑素瘤患者(Rosenberg等人.Science 1986,233:1318–1321)。发现将识别肿瘤细胞上表达的抗原的αβT细胞输注到癌症患者引起白血病肿瘤细胞死亡，导致临床改善和甚至恢复。然而，仅少部分患者受益于αβT细胞疗法，表明需要另外的治疗形式。

近来，γδT细胞在治疗癌症和传染病方面的潜力已被认识到，但是在具有癌症或慢性感染的患者中，γ9δ2 T细胞的数量和功能被抑制。已经表明，自体离体扩增的γ9δ2T细胞的施用引起抗癌作用，偶尔导致转移性疾病的治愈。

美国专利号8,609,410公开了一种用于活化抗原递呈细胞的方法，该方法包括在体外用二膦酸盐和疾病抗原共刺激抗原递呈细胞。

美国专利申请号13/001,581(公布号2012/0107292)公开了一种培养疾病抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和γδT细胞的方法，包括向从血液中分离出的外周血单核细胞的培养物中加入氨基二膦酸盐和疾病抗原，并进行培养程序，直到抗原特异性CTL和γδT细胞增殖并达到对治疗有效的数量。

Itzhaki等人(J Immunothe.34(2):212-220,2011)描述了使用抗CD3抗体和IL-2对肿瘤浸润淋巴细胞的大规模扩增。

Lopez等人(Blood,96(12):3827-3837,2000)公开了，γδ-T细胞对由T细胞有丝分裂原OKT3(抗CD3抗体)和IL-2诱导的细胞凋亡异常敏感。

对于有效的离体T细胞，特别是γδT细胞扩增平台仍然存在未被满足的需求，所述扩增平台可提供极大产量的可用于免疫治疗的存活且有效的细胞。

发明概述

本发明提供了大规模活化和扩增T细胞群体，包括γδT细胞群体的方法。T细胞可来源于需要用所述细胞免疫治疗的受试者或来自另一受试者的外周血单核细胞(PBMC)。扩增方法主要包括两个阶段的扩增，包括第一扩增阶段和第二扩增阶段，第一扩增阶段基于唑来膦酸和任选地白介素-2(IL-2)刺激，第二扩增阶段包括用αCD3和被辐照的饲养细胞PBMC(外周血单核细胞，任选地，同种异体的)和IL-2孵育。

本发明还提供了治疗有其需要的受试者的方法，包括在扩增所述细胞后分别自体或同种异体移植来源于所述受试者或另一受试者的PBMC的γδT细胞，从而使得能够进行实现医学改善或治愈所需的众多移植周期。

因此，如下文所示，顺序施用唑来膦酸刺激与IL-2，然后对γδT细胞群进行阴性(或阳性)选择，且随后用αCD3和IL-2孵育，提供了非常高产量的存活和有能力的γδT细胞。因此，本发明的方法适用于过继性免疫治疗，允许有效和长期的治疗。

根据一些实施方案，提供了一种用于快速扩增T细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提供包含T细胞群体的外周血单核细胞；

(ii)在包含至少一种二膦酸盐的第一培养基中孵育所述外周血单核细胞(PBMC)持续第一时间段，从而获得所述T细胞群体的第一阶段扩增；和

(iii)在包含α-CD3抗体和IL-2的第二培养基中孵育所述外周血单核细胞持续第二时间段，从而获得所述T细胞群体的第二阶段扩增，其中所述第二阶段扩增为至少100倍扩增。

应当理解，本文公开的扩增的倍数是指相对于进入某一(第一或第二)扩增阶段的细胞数目，在该特定阶段结束时的细胞数量的变化倍数。T细胞群体经受步骤(ii)后的扩增也被称为“第一阶段扩增”、“I阶段扩增”或“PIE”，其中T细胞群体经受步骤(iii)后的扩增也被称为“第二阶段扩张”、“快速扩增程序”或“REP”。

在一些实施方案中，T细胞群体包含γδT细胞。在一些实施方案中，T细胞群体由γδT细胞组成。

在一些实施方案中，外周血单核细胞从罹患恶性疾病、自身免疫病或传染病的受试者获得。在一些实施方案中，外周血单核细胞从未罹患恶性疾病、传染病或自身免疫病的健康供体获得。