[发明专利]抵抗乳糖杀伤的突变体微生物

权利要求书

1.产生微生物的方法，所述微生物当在乳糖与其他碳源组合的环境中生长时抵抗乳糖杀伤现象，其中所述方法包括：

a.通过突变改变微生物内乳糖转运蛋白的表达，其包括在内源或外源乳糖转运蛋白基因前引入异源启动子；对编码序列前的含有核糖体结合位点或Kozak序列的非翻译区进行突变；和/或对所述内源乳糖转运蛋白基因的密码子使用进行修饰，其中所述突变导致所述乳糖转运蛋白的表达，

b.使所述突变微生物在包含非乳糖的碳源的培养基上生长，

c.在所述突变微生物的生长期间向所述培养基中添加乳糖，和

d.选择这样的微生物，其在所述包含乳糖的培养基上生长时抵抗乳糖杀伤现象，并且保留用所述乳糖转运蛋白的野生型表达盒获得的乳糖通量的至少50％。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述在内源或外源乳糖转运蛋白基因前引入异源启动子如下进行：a)从基因组中缺失内源乳糖转运蛋白，并将具有异源启动子的内源乳糖转运蛋白重新引入在所述微生物基因组内的另一位置处；或者b)敲除内源乳糖启动子并在所述微生物基因组中的相同位置处引入异源性启动子。

3.根据权利要求1至2所述的方法，其中通过与报道基因翻译偶联和/或通过适配体偶联来检测所述经表达的乳糖转运蛋白。

4.根据权利要求1至2所述的方法，其中通过如由SEQ ID NO:2、3、4和/或5给出的遗传构建体检测所述经表达的乳糖转运蛋白。

5.根据权利要求1至2所述的方法，其中所述乳糖转运蛋白是乳糖通透酶。

6.根据权利要求1至2所述的方法，其中所述微生物是细菌、或酵母。

7.导致乳糖转运蛋白表达的并且不导致乳糖杀伤表型的乳糖转运蛋白表达盒，其中所述表达盒包含由SEQ ID NO:1、7、8、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56或57所示的序列。

8.当在乳糖与其他碳源组合的环境中生长时抵抗乳糖杀伤现象并且能够通过根据权利要求1至6所述的方法获得的微生物，所述微生物包含乳糖转运蛋白表达盒，其中编码序列前的含有核糖体结合位点或Kozak序列的非翻译区是被突变的和/或其中所述内源乳糖转运蛋白基因的密码子使用是被修饰的。

9.当在乳糖与其他碳源组合的环境中生长时抵抗乳糖杀伤现象并且能够通过根据权利要求1至6所述的方法获得的微生物，其中所述微生物是细菌并且包含由SEQ ID NO:1、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56或57所示之序列的乳糖转运蛋白表达盒，或者其中所述微生物是酵母并且包含由SEQ ID NO:7或8所示之序列的乳糖转运蛋白表达盒。

10.根据权利要求8至9所述的微生物，其中使得编码来自乳糖和/或半乳糖降解途径的酶的基因功能降低或无功能。

11.根据权利要求8至10中任一项所述的微生物或根据权利要求7所述的乳糖转运蛋白表达盒用于生产基于乳糖和/或基于半乳糖的特殊产品的用途。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述基于乳糖的特殊产品是特殊的碳水化合物、糖脂和半乳糖基化化合物。